螢光素酶檢測(cè)技術(shù)在小分子藥物靶標(biāo)篩選研究中的應(yīng)用

一，藥物研發(fā)關(guān)鍵點(diǎn)

二，理想的藥物靶標(biāo)篩選模型

1）高靈敏度

2）寬的線性范圍

3）穩(wěn)定且可重復(fù)

4）操作簡(jiǎn)單

5）可進(jìn)行高通量篩選

三，高靈敏度發(fā)光檢測(cè)技術(shù)：螢光素酶檢測(cè)技術(shù)

熒光與化學(xué)發(fā)光的比較

由于熒光需要光激發(fā)后才能發(fā)出光，因此必須有一種方法可以區(qū)分輸入光和輸出光，需要濾光片將某些波長(zhǎng)的光過(guò)濾掉，只讓發(fā)射光的波長(zhǎng)通過(guò)。然而，沒(méi)有任何濾光片是完美的，總有一定量的激發(fā)光會(huì)透過(guò)濾光片，因此就增加了背景噪聲。
 

生物化學(xué)發(fā)光過(guò)程不需要外部光源，均從發(fā)光過(guò)程中產(chǎn)生。這意味著沒(méi)有背景光。因此，產(chǎn)生的光與測(cè)得的光之間存在很強(qiáng)的線性相關(guān)性，其線性范圍遠(yuǎn)大于熒光：發(fā)光過(guò)程為7~8個(gè)數(shù)量級(jí)，而熒光過(guò)程僅為3~4個(gè)數(shù)量級(jí)。
 

螢光素酶：是自然界中能夠產(chǎn)生生物發(fā)光的酶的統(tǒng)稱。

1. 具有酶活性(信號(hào)放大能力)

2. 蛋白小

3. 沒(méi)有內(nèi)源性表達(dá)，背景低

4. 易于定量

5. 高靈敏度、線性范圍寬

6. 反應(yīng)迅速

7. 可實(shí)現(xiàn)雙螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)

 

四，螢光素酶技術(shù)應(yīng)用于藥物靶標(biāo)篩選

基于螢光素酶的應(yīng)用，開發(fā)藥物靶標(biāo)篩選產(chǎn)品：

1）檢測(cè)螢光素酶水平的變化；

2）檢測(cè)ATP，例如：

• RealTime-GloTM Extracellular ATP 檢測(cè)

• GTPase-GloTM檢測(cè)

• ENLITEN® ATP 檢測(cè)

• 激酶活性檢測(cè)

• 細(xì)胞/細(xì)菌活力檢測(cè)

• cAMP

• Pgp糖蛋白檢測(cè)

3）檢測(cè)修飾的螢光素底物，例如：

• Caspase 3/7活性檢測(cè)

逐典螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒

逐典螢光素酶報(bào)告基因檢測(cè)試劑盒旨在準(zhǔn)確、靈敏、高效地測(cè)定螢火蟲螢光素酶活性，應(yīng)用高通量藥物篩選、藥物活性檢測(cè)、大規(guī)模啟動(dòng)子功能測(cè)定、信號(hào)通路等研究。
 

目前，最常使用的螢光素酶主要包括 Firefly luciferase 和 Renilla luciferase，針對(duì)報(bào)告基因檢測(cè)不同的側(cè)重需求，逐典推出了3種檢測(cè)系統(tǒng)。