CCK8試劑檢測耐藥細(xì)胞株P(guān)C9R對吉非替尼耐藥作用的方法及步驟

 
細(xì)胞： PC9R 、PC9
藥物：吉非替尼
儀器與試劑： CCK8 試劑 日本同仁；
分光光度計(jì) TECAN
 
實(shí)驗(yàn)過程：
一：細(xì)胞培養(yǎng)
PC9R 和 PC9 均采用含 10％胎牛血清，1%雙抗(青鏈霉素混合液) 的 DMEM 培養(yǎng)基，置于 37℃， 5% CO2 的培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。
 
二、 吉非替尼藥物貯藏液的配置
向已稱好樣本重量的 EP 管中直接加入 DMSO 稀釋成 50mmol/L 的濃度，使 用前再稀釋弄所需的使用濃度。
 
三、 CCK8 試驗(yàn)
1.  在 96  孔板中配制 100 ul 的細(xì)胞懸液(2000–3000 cells/孔)。將培養(yǎng)板在培養(yǎng) 箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí) (  在 37℃，  5% CO2 的條件下 )。
2.   向培養(yǎng)板加入 10  ul  八個(gè)濃度 (0.390625uM,  0.78125uM,  1.565uM,  3.125 uM ,6.25 uM, 12.5 uM, 25uM, 50 uM) 的待測藥物。
3.  將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育 24 小時(shí)。
4.  向每孔加入 10 ul CCK-8  溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響 O. D 值 的讀數(shù)，斜著培養(yǎng)板壁加， 不要插到培養(yǎng)基液面下加)  。加入后輕輕振搖培養(yǎng)板。
5.  將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
6.  用酶標(biāo)儀測定在 450 nm 處的吸光度。