可視化Transwell細(xì)胞趨化實(shí)驗(yàn)流程詳解

瀏覽次數(shù)：699　發(fā)布日期：2024-4-23　來(lái)源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

定義：趨化性（Chemotaxis，亦被稱為化學(xué)趨向性）是趨向性的一種，指身體細(xì)胞、細(xì)菌及其他單細(xì)胞、多細(xì)胞生物依據(jù)環(huán)境中某些化學(xué)物質(zhì)而趨向的運(yùn)動(dòng)。這對(duì)細(xì)菌尋找食物 (如葡萄糖) 十分重要，細(xì)菌以此趨進(jìn)有較高食物分子濃度的地方，或遠(yuǎn)離有毒 (如苯酚) 的地方。在多細(xì)胞生物中，趨化性對(duì)其發(fā)展和其他正常功能一樣不可或缺。正趨化性指趨向較高化學(xué)物質(zhì)濃度的運(yùn)動(dòng)，而負(fù)趨化性則相反。

使用ibidiμ-Slide Chemotaxis細(xì)胞趨化載玻片的化學(xué)趨化實(shí)驗(yàn)，可以實(shí)時(shí)觀察記錄細(xì)胞的趨化行為。

ibidi細(xì)胞趨化板（80326）

實(shí)驗(yàn)流程：

在實(shí)驗(yàn)開始之前

必要設(shè)備

基本要求：

倒置相差顯微鏡（推薦 5 倍或 10 倍物鏡）
用于延時(shí)圖像采集的相機(jī)
Stage Top 培養(yǎng)箱（大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞類型需要）

推薦擴(kuò)展：

用于并行圖像采集的電動(dòng)載物臺(tái)
自動(dòng)對(duì)焦

1.樣品制備：

使用µ-Slide Chemotaxis，可以進(jìn)行具有定義的趨化梯度的可重現(xiàn)的趨化性測(cè)定。

首先，細(xì)胞播種，這可以在 2D 或 3D 環(huán)境中完成。孵育和細(xì)胞附著后，根據(jù)確定的加載方案，每個(gè)腔室的兩個(gè)儲(chǔ)層都充滿了趨化劑。

µ-Slide Chemotaxis包含 3 個(gè)獨(dú)立的腔室，用于使用緩慢或快速遷移的細(xì)胞進(jìn)行平行趨化性測(cè)定。

它允許在可重現(xiàn)的環(huán)境中創(chuàng)建精確定義的穩(wěn)定趨化梯度。

2.活細(xì)胞成像

生理?xiàng)l件下的活細(xì)胞成像能夠詳細(xì)記錄細(xì)胞隨時(shí)間的遷移，這是正確分析趨化性測(cè)定所必需的過程。

成像周期的持續(xù)時(shí)間取決于細(xì)胞類型（例如，快速遷移的白細(xì)胞或緩慢遷移的腫瘤細(xì)胞或成纖維細(xì)胞）和環(huán)境條件（例如，趨化劑的類型和濃度）。用于緩慢遷移細(xì)胞的典型視頻顯微鏡設(shè)置包括在 24 小時(shí)內(nèi)每 2.5-10 分鐘拍攝一張照片。

由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)最佳地包含來(lái)自 20-40 個(gè)單細(xì)胞的跟蹤數(shù)據(jù)，因此應(yīng)使用低倍顯微鏡物鏡，例如 4 倍或 10 倍。

ibidi Stage Top 培養(yǎng)箱提供顯微鏡下的生理環(huán)境，可在短期和長(zhǎng)期趨化性測(cè)定期間實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞成像。

MDA-MB-231 人乳腺癌細(xì)胞在膠原凝膠中遷移的延時(shí)顯微成像。在 µ-Slide Chemotaxis 中以 EGF 作為趨化劑觀察細(xì)胞 24 小時(shí)。生理?xiàng)l件由 ibidi 加熱和氣體培養(yǎng)系統(tǒng)維持。

3.細(xì)胞追蹤

通常，趨化性測(cè)定的活細(xì)胞顯微鏡檢查會(huì)創(chuàng)建時(shí)間圖像堆棧，其中每個(gè)圖像顯示特定時(shí)間點(diǎn)的確切細(xì)胞位置。

為了量化它們的運(yùn)動(dòng)，通過確定它們?cè)趫D像堆棧的每一幀上的位置來(lái)跟蹤單個(gè)細(xì)胞。跟蹤可以手動(dòng)完成，也可以使用特殊軟件自動(dòng)完成。之后，每個(gè)跟蹤單元格 (x, y) 的位置值可用于每個(gè)時(shí)間點(diǎn) (t) 并可以進(jìn)一步分析

自動(dòng)跟蹤和數(shù)據(jù)分析：

MetaVi Labs的Chemotaxis FastTrack AI 圖像分析是一種基于 AI 的自動(dòng)圖像分析解決方案，用于趨化性測(cè)定�；诰W(wǎng)絡(luò)的軟件將快速而強(qiáng)大的細(xì)胞跟蹤與人工智能 (AI) 相結(jié)合，無(wú)需標(biāo)記即可進(jìn)行客觀且可重復(fù)的分析。只需將您的數(shù)據(jù)上傳到您的 FastTrack AI 帳戶并開始分析工作。在 1 到 2 小時(shí)內(nèi)，您將收到一份詳細(xì)的報(bào)告以供下載和進(jìn)一步評(píng)估。