拍出最真實最清晰的圖片—InnoQuant助力生物組織熒光切片掃描和分析
免疫熒光染色技術(shù)廣泛用于樣本中待測標(biāo)志物的含量分析,待測標(biāo)志物在細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞外的分布以及不同標(biāo)志物之間的相互作用,在細(xì)胞水平和組織水平進(jìn)行實驗論證,有效銜接微觀分子水平到宏觀動物整體水平之間的研究工作。
在切片免疫熒光染色實驗中,掃描成像是其中關(guān)鍵一環(huán),高清的圖像更利于后續(xù)的空間結(jié)構(gòu)分析和精準(zhǔn)的定量分析。因此,選擇合適的切片掃描設(shè)備尤為重要,F(xiàn)有主要兩大類,一類是以共聚焦顯微鏡為代表的設(shè)備,其成像效果佳,可有效去除背景熒光,但是操作復(fù)雜,使用門檻高,沒有足夠的經(jīng)驗很難拍出高質(zhì)量的圖片。另一類設(shè)備是玻片掃描儀,相對于共聚焦顯微鏡,操作簡單易上手,然而主流的熒光切片掃描儀多是寬場成像(非共聚焦成像),圖片的背景熒光強(qiáng)、圖片質(zhì)量差,無法精準(zhǔn)定位和定量。
同時,這兩類設(shè)備存在一些共性問題:易脫焦-掃描儀不能判斷最佳的聚焦位置,尤其面對平整度較差的樣本時更突出(圖1)。此外還需要后期拼接——受限于工作機(jī)制,需要將整個樣本分割成小塊區(qū)域,逐個掃描之后再拼接完成,一定程度上導(dǎo)致圖像在接縫處失真。由于CCD是采用面成像的工作原理,成像區(qū)域的中央和四周光強(qiáng)不一致,反映在圖像上為中央明亮,周圍暗淡,仍需要后期進(jìn)行陰影校正。(圖2)
圖1 (左)平整度較差的樣本,掃描完成的圖像四周出現(xiàn)明顯脫焦 (右)傳統(tǒng)掃描儀掃描后的圖片,需要后期拼接和陰影校正,影響圖片質(zhì)量
在此背景下,法國Innopsys公司推出了InnoQuant熒光玻片掃描儀。這款設(shè)備利用激光共聚焦成像,逐點(diǎn)成像、整片一次掃描的技術(shù),給免疫熒光染色技術(shù)帶來了新的革命。
InnoQuant的優(yōu)點(diǎn)
InnoQuant內(nèi)置三種對焦模式:定焦(Fixed focus)、Autofocus by surface和Autofocus by content。除了定焦模式采用固定不變的焦距之外,另外兩種模式可以根據(jù)樣本的內(nèi)部結(jié)構(gòu)或者玻片自身的平整度,識別出最佳的聚焦平面,避免脫焦。
- 2. 逐點(diǎn)掃描,無需拼接,無需陰影校正
不用于其他設(shè)備的多個分割區(qū)域掃描再拼接的方法,InnoQuant采用逐點(diǎn)掃描,一次成像的方式,將整個樣本最真實地保存下來,無需任何后續(xù)拼接和加工。此外,逐點(diǎn)掃描保證采集樣本信息時所有的激發(fā)光都保持同一水平,不存在因光強(qiáng)不一致導(dǎo)致的結(jié)果失真,無需陰影校正,保證后續(xù)分析結(jié)果準(zhǔn)確。(圖2)
圖2 (A)傳統(tǒng)掃片原理(左)與InnoQuant掃片原理(右) (B)百合花切片掃描結(jié)果比較:傳統(tǒng)掃片裝置(左)與InnoQuant掃描結(jié)果(右)
InnoQuant內(nèi)置4組獨(dú)立激光光源和PMT檢測器,每個PMT最多可安裝7個濾光片,不但兼容常用熒光染料,還可根據(jù)用戶需求定制。此外,4個檢測通道可同時工作,一張4熒光染料標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)玻片(26mm*76mm),在17min內(nèi)完成掃描,而共聚焦顯微鏡則需要數(shù)個小時,InnoQuant掃描速度更快。
總結(jié)
作為一款最新推出產(chǎn)品,InnoQuant憑借其獨(dú)特的工作原理,強(qiáng)有力的硬件配置,已成為滿足廣大科研工作者免疫熒光染色的強(qiáng)有力的助手。
Innopsys 成立于1999年?偛课挥诜▏,一直致力于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域相關(guān)儀器和軟件的自主研發(fā)和生產(chǎn)。InnoQuant組織切片/生物芯片掃描儀,采用先進(jìn)的共聚焦PMT檢測器和多激光掃描光路,可以同時進(jìn)行多通道熒光檢測。不僅掃描結(jié)果清晰,而且無需后續(xù)拼接和陰影校正處理,在組織切片和生物芯片掃描領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用。
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