掃描電鏡制樣之5種常用的生物樣品干燥方法的介紹

自然風(fēng)干——飛納掃描電鏡直接觀察螨蟲(chóng)

02  烘干干燥法
烘干干燥法是將要研究的樣品用烘干箱烘干，一般溫度控制在 80℃ 以下，烘干程度以含水量在 5% 以下為好。此方法的干燥速度較快，但水分蒸發(fā)時(shí)可能造成樣品變形或斷裂。適用于不易變形且耐熱的樣品，比如淀粉粒、孢子粉等。

烘干的花粉噴金后直接可以用二次電子觀察

03  臨界點(diǎn)干燥法
臨界點(diǎn)干燥法是利用物質(zhì)在臨界狀態(tài)下，液體和氣體的密度相等，氣液界面完全消失，液體的表面張力系數(shù)為零。臨界點(diǎn)干燥法之所以一直被視為制作生物醫(yī)學(xué)掃描樣品最可靠的干燥方法，是因?yàn)榇朔�能消除液體表面張力的作用，干燥出的樣品能較大程度地保存其自然形態(tài)。

04  冷凍干燥法
冷凍干燥法是將含水樣品放入低溫環(huán)境中冷凍，或使用溶劑將樣品中的水逐級(jí)替換后冷凍，然后抽真空升華。它是利用低溫和真空，使樣品中的水分或溶劑直接升華，以達(dá)到干燥樣品的目的。冷凍干燥過(guò)程不經(jīng)過(guò)液相階段，因而避免了氣相和液相之間表面張力對(duì)樣品的損傷。

05  真空干燥法
真空干燥法指的是將經(jīng)脫水（多用梯度脫水）的樣品置于真空容器中進(jìn)行干燥的方法。真空干燥法選用高熔點(diǎn)的有機(jī)溶劑（叔丁醇、乙腈、六甲基二硅胺烷、正丁醇等）作升華介質(zhì)，既保留了冷凍干燥法的優(yōu)點(diǎn)，又不用對(duì)樣品進(jìn)行冷凍處理，無(wú)冷凍損傷，且操作簡(jiǎn)單。適用于所有生物樣品，特別是細(xì)菌、細(xì)胞等微小樣品。
 

經(jīng)過(guò)梯度脫水真空干燥的桿菌可以輕松獲得高倍圖像

小結(jié)
干燥方法在不斷改進(jìn)，但還是只能把由干燥引起的樣品變形控制在一定的范圍內(nèi)。上述 5 種干燥方法各有優(yōu)缺點(diǎn)，且各有適用的生物樣品種類。我們?cè)谶x擇生物樣品干燥的方法時(shí)，盡量選擇能保持樣品表面真實(shí)結(jié)構(gòu)的方法，在保證掃描電鏡狀態(tài)下，盡量還原樣品表面細(xì)節(jié)。

對(duì)于生物樣品，飛納電鏡低真空模式可以直接觀察一些生物樣品，如新鮮植物葉片，昆蟲(chóng)等。觀察葉子氣孔，高亮度的 CeB6 燈絲可以在低曝光時(shí)間下快速拍照，獲得高質(zhì)量圖像，避免了長(zhǎng)時(shí)間曝光導(dǎo)致氣孔關(guān)閉以及長(zhǎng)時(shí)間抽真空導(dǎo)致葉片失水收縮。
 

飛納電鏡低真空下觀察葉子氣孔

此外，飛納電鏡的專用控溫樣品杯可以控制樣品溫度，進(jìn)而改變樣品周圍的濕度，最大限度地降低電子束和真空度對(duì)樣品的損壞。適用于一些含水較高的水凝膠，蛋白，藻類等樣品，在冷凍狀態(tài)下，不脫水，背散射直接觀察，可以保持樣品的原始形貌結(jié)構(gòu)。
 

冷凍的水凝膠，觀察到其大范圍內(nèi)，短程有序，長(zhǎng)程無(wú)序