影響蛋白與硝酸纖維素膜結(jié)合的四個主要方面

pH水平
緩沖液中pH水平在很大程度上會影響蛋白與膜的結(jié)合。由于NC膜無酸性質(zhì)子，因此調(diào)節(jié)pH時僅僅能改變的是蛋白的性質(zhì)。蛋白質(zhì)的溶解度在其等電點（pI）時最小。過大或過小的pH值可使蛋白發(fā)生變性，使其結(jié)合特性發(fā)生巨大改變，甚至產(chǎn)生聚集及析出沉淀。綜上原則，在探索使蛋白溶液能在固相中理想分布的條件時，對于檢測線最理想的緩沖液條件是其pH值等于或接近pI的時候。

常用的緩沖系統(tǒng)有磷酸鹽、硼酸鹽、碳酸鹽和Tris鹽緩沖液。值得注意的是，側(cè)向流檢測應(yīng)用時捕獲分子在膜上需被干燥，這意味著緩沖液所有組分，除可揮發(fā)成分外，都需在膜上干燥。這就使得可揮發(fā)的緩沖液如醋酸銨或碳酸銨特別受青睞。但高濃度的伯銨（例如來自Tris緩沖液）可導(dǎo)致捕獲蛋白中酸性氨基酸殘基（谷氨酸、天冬氨酸）與緩沖離子氨基間形成鹽橋，從而遮蓋住結(jié)合位點。

離子濃度
電解質(zhì)溶液中離子的解離可降低蛋白-蛋白之間的相互作用力，因此在特定離子濃度范圍內(nèi)溶液中蛋白溶解度顯著增強（鹽溶效應(yīng)）。而過高離子強度則相反（鹽析效應(yīng)）。這是因為此時大量的溶解離子占據(jù)越來越多的水分子，導(dǎo)致蛋白分子周圍溶解層塌陷，蛋白分子相互作用，從而形成聚集和沉淀。根據(jù)這一原則，蛋白應(yīng)在應(yīng)用緩沖液中進行溶解，同時還應(yīng)使其保持在利于膜固相分布的環(huán)境中。利用鹽析效應(yīng)可以合理的降低溶液中分子的穩(wěn)定性。然而，某些鹽如硫酸銨能使蛋白溶液穩(wěn)定化降低，控制的難度也有所上升。鹽濃度的小的變化（如蒸發(fā)導(dǎo)致的）會嚴重影響沉淀的程度。除此之外，使用這些類型的緩沖液干燥后還會將大量的鹽引進膜系統(tǒng)中，從而嚴重干擾整個測試。最大眾的意見是使緩沖液中的離子強度盡可能地低，以減少鹽溶效應(yīng)。緩沖鹽（PBS,TBS）通常不被推薦。