流式細(xì)胞術(shù)FCM在染色體倍性分析上的優(yōu)勢及實驗步驟介紹

倍性育種，指通過改變?nèi)旧�體的數(shù)量，產(chǎn)生不同的變異個體，進(jìn)而選擇優(yōu)良變異個體培育新品種。正常的配子細(xì)胞中所包含的染色體數(shù)或半數(shù)的體細(xì)胞染色體數(shù)稱為一套單倍染色體，用符號n 表示。具有一個染色體組的細(xì)胞和由這樣的細(xì)胞組成的個體稱為單倍體(n) ，具有兩個染色體組的細(xì)胞或個體稱為二倍體（2n），具有兩個以上整套染色體組的細(xì)胞或個體則稱為多倍體，包括三倍體（3n）、四倍體（4n）等。

傳統(tǒng)的倍性鑒定主要采用常規(guī)壓片法統(tǒng)計染色體數(shù)目，但采用這種方法很難尋找到分裂中期染色體分散良好并可進(jìn)行計數(shù)的細(xì)胞，而且整個過程耗時長，檢測效率低。采用流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，F(xiàn)CM）進(jìn)行倍性分析的方法簡化了倍性分析的過程，可以快速準(zhǔn)確檢測同一物種范圍內(nèi)不同倍性的樣品。FCM作為一項快速、高效的檢測技術(shù)，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞分類學(xué)、植物遺傳學(xué)及植物生理學(xué)等研究領(lǐng)域中。FCM常被用于鑒定植物倍性水平，通過檢測植株G0/G1峰的細(xì)胞核DNA含量可以判斷出植物的倍性。

實驗原理
首先需要裂解液將組織中細(xì)胞核釋放出來，并打開DNA鏈，然后用DAPI染液將細(xì)胞核DNA上的A-T
堿基對特異性染色，再用儀器檢測出被染色的A-T堿基對發(fā)出的熒光強度。比如二倍體的熒光強度是100（橫坐標(biāo)），那么單倍體的熒光強度就是50（橫坐標(biāo)）。縱坐標(biāo)是細(xì)胞數(shù)量的顯示，通常來說，信號峰高說明信號比較好，雜質(zhì)少。