活細胞成像應用于NK殺傷實驗的研究
前言：
殺傷功能是機體免疫功能的一個重要方面，免疫系統(tǒng)中有多種具有殺傷功能的靶細胞，如自然殺傷細胞（NK）、細胞毒性T細胞（CTL）、具有ADCC作用的單核細胞巨噬細胞等。自然殺傷（NK）細胞能識別病原體、病毒感染細胞或腫瘤細胞并將其殺死，在初級防御中發(fā)揮著關鍵作用[1]。NK細胞英文全稱為Natural killer cell，隨著對NK細胞深入研究，科研人員已開發(fā)出針對NK細胞的治療策略，目前正處于臨床前研究和臨床試驗的不同階段。在這些研究中，評價NK細胞的有效性十分重要，細胞殺傷實驗也成為NK細胞治療中必不可少的實驗方法。
鉻釋放測定法是量化 T 細胞和 NK 細胞等免疫細胞的細胞毒性的一種眾所周知的常用方法，它測量靶細胞死亡時釋放的 51Cr 量。其檢測原理是鉻酸鈉（Na251CrO4）能進入到增殖的細胞內，與細胞漿蛋白質牢固地結合。當標記的51Cr細胞受到損傷或死亡之后，即可釋放出51Cr。51Cr輻射γ射線，通過測定受損傷或死亡靶細胞釋放到上清中地51Cr，即可計算出細胞的殺傷能力。這種方法很難進行長期篩查，因為不僅存在輻射風險，而且還必須反復收集和測量含有 51Cr 的上清液[2]。
利用 Celloger®進行實時成像，可以很容易地觀察到熒光染色的靶細胞因凋亡而減少，從而可以量化免疫細胞的殺傷作用。
設備實拍：
我們通過 Celloger® Mini Plus 成像分析法評估了 NK 細胞的殺傷能力，并使用 NK 92 細胞（一種從血液中提取的淋巴母細胞）作為 NK 效應細胞。K562 細胞是一種源自人類慢性骨髓性白血病的細胞系，被用作靶細胞，并通過 Cell Tracker™ Green CMFDA 染料進行細胞質染色。
結果：
在固定靶細胞 K562 濃度的情況下，通過增加效應 NK92 的比例進行共培養(yǎng)，實時成像證實，NK 細胞比例越高，誘導靶細胞 K562 凋亡的效率越高，從而減少了熒光細胞的數(shù)量（圖 1）。由于 NK 細胞的受體能識別目標抗原并與之結合，因此可以觀察到 NK 細胞與目標細胞聚集在一起。據(jù)推測，NK 細胞的濃度越高，聚集的體積就越大，殺死腫瘤細胞的概率就越高。
圖1. K562 細胞的消亡效應取決于 NK-92 細胞的濃度 用 Cell Tracker™ Green CMFDA 染色的 NK 92 細胞（效應細胞）與 K562 細胞（目標細胞）的比例增加，并進行共培養(yǎng)。用 Celloger® Mini Plus（4X 物鏡）每小時采集明視野和綠色熒光通道圖像，最長持續(xù) 20 小時。A. 明視野圖像與綠色熒光通道圖像合并。 B. 綠色熒光圖像。
此外，由于 Celloger 具有拼接功能，可以獲得更大區(qū)域的圖像，因此可以提高測量精度（圖 2）。
圖2. 使用Celloger® Mini Plus 分析應用程序中對一個孔成像后進行3×3拼接的畫面
結論：
Celloger® Mini Plus 是一種自動活細胞成像系統(tǒng)，可用于各種基于細胞的研究。該系統(tǒng)基于先進的熒光（綠/紅）和光學顯微鏡技術，可獲得清晰的圖像和結果。此外，系統(tǒng)內部還裝有一個可移動的攝像頭，讓您可以在更穩(wěn)定的條件下觀察活細胞，而無需移動平板，實現(xiàn)對多點位的細胞監(jiān)測，以及系統(tǒng)擁有的Z-stacking與Stitching功能可以豐富您的圖像結果。
使用康和達 Celloger® Mini Plus進行實時細胞監(jiān)測和分析，提高科研效率。無需將細胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,即可進行復雜的研究和數(shù)據(jù)分析。在保證實驗質量的同時為您節(jié)約寶貴時間。
Celloger® Mini Plus 應用場景
1）細胞監(jiān)測
2）細胞增殖
3）細胞凋亡
4）活性氧檢測
5）細胞愈合實驗
6）細胞毒性實驗
7）細胞球體篩選
8）轉染效率評估
[1] Prager I, Watzl C. Mechanisms of natural killer cell-mediated cellular cytotoxicity. J Leukoc Biol. 2019 Jun;105(6):1319-1329.
[2] Karimi MA, Lee E, Bachmann MH, Salicioni AM, Behrens EM, Kambayashi T, Baldwin CL. Measuring cytotoxicity by bioluminescence imaging outperforms the standard chromium-51 release assay. PLoS One. 2014 Feb 19;9(2):e89357.
殺傷功能是機體免疫功能的一個重要方面，免疫系統(tǒng)中有多種具有殺傷功能的靶細胞，如自然殺傷細胞（NK）、細胞毒性T細胞（CTL）、具有ADCC作用的單核細胞巨噬細胞等。自然殺傷（NK）細胞能識別病原體、病毒感染細胞或腫瘤細胞并將其殺死，在初級防御中發(fā)揮著關鍵作用[1]。NK細胞英文全稱為Natural killer cell，隨著對NK細胞深入研究，科研人員已開發(fā)出針對NK細胞的治療策略，目前正處于臨床前研究和臨床試驗的不同階段。在這些研究中，評價NK細胞的有效性十分重要，細胞殺傷實驗也成為NK細胞治療中必不可少的實驗方法。
鉻釋放測定法是量化 T 細胞和 NK 細胞等免疫細胞的細胞毒性的一種眾所周知的常用方法，它測量靶細胞死亡時釋放的 51Cr 量。其檢測原理是鉻酸鈉（Na251CrO4）能進入到增殖的細胞內，與細胞漿蛋白質牢固地結合。當標記的51Cr細胞受到損傷或死亡之后，即可釋放出51Cr。51Cr輻射γ射線，通過測定受損傷或死亡靶細胞釋放到上清中地51Cr，即可計算出細胞的殺傷能力。這種方法很難進行長期篩查，因為不僅存在輻射風險，而且還必須反復收集和測量含有 51Cr 的上清液[2]。
利用 Celloger®進行實時成像，可以很容易地觀察到熒光染色的靶細胞因凋亡而減少，從而可以量化免疫細胞的殺傷作用。
設備實拍：
我們通過 Celloger® Mini Plus 成像分析法評估了 NK 細胞的殺傷能力，并使用 NK 92 細胞（一種從血液中提取的淋巴母細胞）作為 NK 效應細胞。K562 細胞是一種源自人類慢性骨髓性白血病的細胞系，被用作靶細胞，并通過 Cell Tracker™ Green CMFDA 染料進行細胞質染色。
結果：
在固定靶細胞 K562 濃度的情況下，通過增加效應 NK92 的比例進行共培養(yǎng)，實時成像證實，NK 細胞比例越高，誘導靶細胞 K562 凋亡的效率越高，從而減少了熒光細胞的數(shù)量（圖 1）。由于 NK 細胞的受體能識別目標抗原并與之結合，因此可以觀察到 NK 細胞與目標細胞聚集在一起。據(jù)推測，NK 細胞的濃度越高，聚集的體積就越大，殺死腫瘤細胞的概率就越高。
圖1. K562 細胞的消亡效應取決于 NK-92 細胞的濃度 用 Cell Tracker™ Green CMFDA 染色的 NK 92 細胞（效應細胞）與 K562 細胞（目標細胞）的比例增加，并進行共培養(yǎng)。用 Celloger® Mini Plus（4X 物鏡）每小時采集明視野和綠色熒光通道圖像，最長持續(xù) 20 小時。A. 明視野圖像與綠色熒光通道圖像合并。 B. 綠色熒光圖像。
此外，由于 Celloger 具有拼接功能，可以獲得更大區(qū)域的圖像，因此可以提高測量精度（圖 2）。
圖2. 使用Celloger® Mini Plus 分析應用程序中對一個孔成像后進行3×3拼接的畫面
結論：
Celloger® Mini Plus 是一種自動活細胞成像系統(tǒng)，可用于各種基于細胞的研究。該系統(tǒng)基于先進的熒光（綠/紅）和光學顯微鏡技術，可獲得清晰的圖像和結果。此外，系統(tǒng)內部還裝有一個可移動的攝像頭，讓您可以在更穩(wěn)定的條件下觀察活細胞，而無需移動平板，實現(xiàn)對多點位的細胞監(jiān)測，以及系統(tǒng)擁有的Z-stacking與Stitching功能可以豐富您的圖像結果。
使用康和達 Celloger® Mini Plus進行實時細胞監(jiān)測和分析，提高科研效率。無需將細胞從二氧化碳培養(yǎng)箱中取出,即可進行復雜的研究和數(shù)據(jù)分析。在保證實驗質量的同時為您節(jié)約寶貴時間。
- 輕松實現(xiàn)實時監(jiān)測
- 多點成像功能
- 兼容多種培養(yǎng)容器
Celloger® Mini Plus 應用場景
1）細胞監(jiān)測
2）細胞增殖
3）細胞凋亡
4）活性氧檢測
5）細胞愈合實驗
6）細胞毒性實驗
7）細胞球體篩選
8）轉染效率評估
[1] Prager I, Watzl C. Mechanisms of natural killer cell-mediated cellular cytotoxicity. J Leukoc Biol. 2019 Jun;105(6):1319-1329.
[2] Karimi MA, Lee E, Bachmann MH, Salicioni AM, Behrens EM, Kambayashi T, Baldwin CL. Measuring cytotoxicity by bioluminescence imaging outperforms the standard chromium-51 release assay. PLoS One. 2014 Feb 19;9(2):e89357.
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