流式細(xì)胞儀的發(fā)展歷史及其原理與應(yīng)用進(jìn)展

魏熙胤　牛瑞芳(天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室　天津　300060)

摘　要　流式細(xì)胞分析(flow cytometry FCM) ,即流式細(xì)胞術(shù),是用流式細(xì)胞儀(flow cytome-ter FCM) 測(cè)量液相中懸浮細(xì)胞或微粒的一種現(xiàn)代分析技術(shù)。它是眾多不同學(xué)術(shù)背景、不同科技領(lǐng)域相結(jié)合的結(jié)晶。它是物理學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)等綜合運(yùn)用的產(chǎn)物。本文就流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展歷史、流式細(xì)胞儀的原理及在各領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行綜述,闡明現(xiàn)代流式細(xì)胞術(shù)由于結(jié)合單克隆抗體技術(shù)、定量熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù),使其在生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)、材料學(xué)等眾多研究領(lǐng)域中的應(yīng)用有更加突飛猛進(jìn)的發(fā)展。

關(guān)鍵詞　流式細(xì)胞術(shù)(FCM) 　歷史　原理　應(yīng)用
　流式細(xì)胞分析(flow cytometry FCM) 即流式細(xì)胞術(shù),是用流式細(xì)胞儀(flow cytometer FCM) 測(cè)量液相中懸浮細(xì)胞或微粒的一種現(xiàn)代分析技術(shù)。它凝結(jié)眾多不同學(xué)術(shù)背景、不同科研領(lǐng)域科學(xué)家的心血。從流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)明、發(fā)展直到今天在各個(gè)領(lǐng)域應(yīng)用的拓展,每一步都是諸如電子技術(shù)、流體力學(xué)、計(jì)算機(jī)科學(xué)、激光技術(shù)、生物學(xué)、生物技術(shù)、高等數(shù)學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)、有機(jī)化學(xué)和生物物理學(xué)等學(xué)科知識(shí)綜合運(yùn)用的結(jié)晶�，F(xiàn)代流式細(xì)胞術(shù)更是由于它結(jié)合單克隆抗體技術(shù)、定量細(xì)胞化學(xué)技術(shù)和定量熒光細(xì)胞化學(xué),使其在生物學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、藥物學(xué)、材料學(xué)等眾多研究領(lǐng)域中的應(yīng)用有更加突飛猛進(jìn)的發(fā)展。流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展史也就是各個(gè)相關(guān)學(xué)科的發(fā)展史的縮影。

1 　流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展歷史
1930 年,Casperrsson 和Thorell 開始致力于細(xì)胞的計(jì)數(shù);1934 年,Moldaven 是世界上最早設(shè)想使細(xì)胞檢測(cè)自動(dòng)化的人,他試圖用光電儀記錄流過(guò)1 根毛細(xì)管的細(xì)胞數(shù)量;1936 年,Caspersson 等引入顯微光度術(shù);1940 年,Coons 提出用結(jié)合熒光素的抗體去標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白;1947 年,Guclcer 運(yùn)用層流和湍流原理研制煙霧微粒計(jì)數(shù)器;1949 年,Coulter 提出在懸液中計(jì)數(shù)粒子的方法并獲得專利;1950 年,Caspersson 用顯微分光光度計(jì)在紫外(UV) 和可見(jiàn)光光譜區(qū)檢測(cè)細(xì)胞;1953 年,Croslannd2Taylor 應(yīng)用分層鞘流原理,成功地設(shè)計(jì)紅細(xì)胞光學(xué)自動(dòng)計(jì)數(shù)器;1953年,Parker 和Hutcheon 描述一種全血細(xì)胞計(jì)數(shù)器裝置,成為流式細(xì)胞儀的雛形; 1954 年, Beirne 和Hutchcon 發(fā)明光電粒子計(jì)數(shù)器;1959 年,B 型Coulter計(jì)數(shù)器問(wèn)世; 1965 年, Kamemtsky 等提出兩個(gè)設(shè)想:(1) 用分光光度計(jì)定量細(xì)胞成分; (2) 結(jié)合測(cè)量值對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分類; 1967 年, Kamemtsky 和Melamed 在.Moldaven 的方法基礎(chǔ)上提出細(xì)胞分選的方法;1969年,Van Dilla Fulwyler 及其同事們?cè)贚osALmos ,NM(即現(xiàn)在的National Flow Cytometry Resource Labs) 發(fā)明第一臺(tái)熒光檢測(cè)細(xì)胞計(jì);1972 年,Herzenberg 研制出一個(gè)細(xì)胞分選器的改進(jìn)型,能夠檢測(cè)出經(jīng)熒光標(biāo)記抗體染色的細(xì)胞的較弱的熒光信號(hào); 1975 年,Kochler 和Milstein 提出單克隆抗體技術(shù),為細(xì)胞研究中大量的特異性免疫試劑的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)�，F(xiàn)今隨著光電技術(shù)的進(jìn)一步發(fā)展,流式細(xì)胞儀已開始向模塊化發(fā)展,即它的光學(xué)系統(tǒng)、檢測(cè)器單元和電子系統(tǒng)都可以按照實(shí)驗(yàn)要求隨意更換。進(jìn)入21 世紀(jì),流式細(xì)胞術(shù)已經(jīng)日臻完善,成為分析細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域中無(wú)可替代的重要工具。

2 　流式細(xì)胞儀的工作原理
流式細(xì)胞儀主要由4 部分組成:液流系統(tǒng)、光學(xué)系統(tǒng)、電子系統(tǒng)、分析系統(tǒng)。它只能檢測(cè)懸浮的單細(xì)胞或微粒的信號(hào)。一般是將待測(cè)細(xì)胞或微粒進(jìn)行熒光染色后制成懸液標(biāo)本,在一定氣體壓力下將待測(cè)樣品壓入流動(dòng)室,用不含細(xì)胞或微粒的緩沖液(又稱鞘液) 在高壓下從鞘液管噴出,鞘液管入口方向與待測(cè)細(xì)胞或微粒流成一定角度,使鞘液包繞著細(xì)胞或微粒高速流動(dòng),形成一個(gè)圓形的流束(即鞘流) ,待測(cè)細(xì)胞在鞘液的包裹下單行排列,依次通過(guò)流式細(xì)胞儀的檢測(cè)區(qū)域,經(jīng)激發(fā)光激發(fā)后產(chǎn)生熒光信號(hào)。流式細(xì)胞儀通常以激光作為激發(fā)光源,經(jīng)過(guò)聚焦整形后的光束垂直照射在樣品流上,被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光。這兩種信號(hào)同時(shí)被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管( PMT) 接收。光散射信號(hào)在前向小角度進(jìn)行檢測(cè),稱為前向散射(forward～atter ,FSC) ,這種信號(hào)基本上反映細(xì)胞體積的大小;90°散射光又稱側(cè)向散射(side scatter ,SSC) ,是指與激光束2液流平面垂直的散射光,其信號(hào)強(qiáng)度可反映細(xì)胞部分結(jié)構(gòu)的信息。熒光信號(hào)的接收方向與激光束垂直,經(jīng)過(guò)一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,形成多個(gè)不同波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。這些熒光信號(hào)的強(qiáng)度代表所測(cè)細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其細(xì)胞內(nèi)、核內(nèi)物質(zhì)的濃度,經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號(hào),再通過(guò)模/ 數(shù)轉(zhuǎn)換器,將連續(xù)的電信號(hào)轉(zhuǎn)換為可被計(jì)算機(jī)識(shí)別的數(shù)字信號(hào)。計(jì)算機(jī)采集所測(cè)量到的各種信號(hào)進(jìn)行計(jì)算處理,將分析結(jié)果顯示在計(jì)算機(jī)屏幕上,也可以打印出來(lái),還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲(chǔ)在硬盤上,以備日后的查詢或進(jìn)一步分析。檢測(cè)數(shù)據(jù)的顯示視測(cè)量參數(shù)的不同而有多種形式可供選擇。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá),其x 軸為測(cè)量的散射光或熒光的強(qiáng)度(可以是線性軸,也可以選擇對(duì)數(shù)軸) ,縱軸為相對(duì)細(xì)胞數(shù)。一般來(lái)說(shuō),流式細(xì)胞儀坐標(biāo)軸的分辨率有256 或1024 通道數(shù),這視其模/數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定。對(duì)于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),既可以單獨(dú)顯示每個(gè)參數(shù)的直方圖,也可以選擇二維的散點(diǎn)圖、等高線圖或三維的立體視圖等。流式細(xì)胞儀還可以對(duì)分析中的目的細(xì)胞進(jìn)行分選提取,它通過(guò)分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的。在流動(dòng)室的噴嘴上安裝有超高頻的壓電晶體,可以產(chǎn)生高頻振蕩,使液流斷裂為均勻的液滴,待測(cè)細(xì)胞就包含在液滴之中。將這些液滴充上正或負(fù)電荷,當(dāng)帶電液滴通過(guò)電場(chǎng),在電場(chǎng)的作用下發(fā)生偏轉(zhuǎn),然后落入相應(yīng)的收集器之中,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞分選。流式細(xì)胞儀的分選速度從以往的5000 個(gè)/ s 提高到現(xiàn)在的25000 個(gè)/ s。

流式細(xì)胞術(shù)發(fā)展趨勢(shì)可歸納為:
①流式細(xì)胞儀從單純大型儀器發(fā)展為適應(yīng)各種實(shí)際應(yīng)用的便攜式、臺(tái)式、高分辨率、高質(zhì)量分選的研究型流式細(xì)胞儀;
②對(duì)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)熒光參數(shù),從采用熒光單色、雙色分析發(fā)展為多色分析,目前最多可同時(shí)檢測(cè)15 種熒光信號(hào);
③從檢測(cè)參數(shù)的相對(duì)定量發(fā)展為絕對(duì)定量;
④從檢測(cè)參數(shù)的手動(dòng)人工分析發(fā)展為利用計(jì)算機(jī)軟件的自動(dòng)分析;
⑤所采用的熒光試劑,從非配套試劑發(fā)展為配套的試劑盒試劑。而這一切,就要求流式細(xì)胞儀使用者和科研人員,一定要不斷地有意識(shí)地學(xué)習(xí)上述各門學(xué)科知識(shí),只有這樣才能更好地將流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用到生物醫(yī)學(xué)的臨床實(shí)踐和基礎(chǔ)科學(xué)研究工作中去。

3 　流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用
流式細(xì)胞術(shù)的應(yīng)用,簡(jiǎn)單用一句話概括就是,凡能被熒光分子標(biāo)記的細(xì)胞或微粒均能用流式細(xì)胞儀檢測(cè)。其中細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域是流式細(xì)胞術(shù)在基礎(chǔ)研究中應(yīng)用范圍最廣泛的領(lǐng)域,因?yàn)樽畛踹@個(gè)技術(shù)就是為此目的而設(shè)計(jì)的。
3.1 　流式細(xì)胞術(shù)在細(xì)胞生物學(xué)中的應(yīng)用
3.1.1
　染色體核型分析　用流式細(xì)胞術(shù)可將分離的染色體進(jìn)行分類、純化。傳統(tǒng)的核型分析在取材、培養(yǎng)、涂片、固定后,用分帶技術(shù)顯示出不同染色體的特征信息,然后再顯微照相,放大、剪接、組型。這是一個(gè)十分費(fèi)時(shí)且不可避免摻有主觀因素的技術(shù)。目前,用儀器自動(dòng)分型的方法,一是采用圖像技術(shù)的靜態(tài)方法,再有就是采用流式細(xì)胞術(shù)。后者除可做染色體分析外還可純化,得到克隆實(shí)驗(yàn)所要求的染色體,這是其他任何技術(shù)都無(wú)法完成的,為此設(shè)計(jì)專門的特種流式細(xì)胞計(jì)。

3.1.2
　在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域中的應(yīng)用　流式細(xì)胞術(shù)的分析功能和分選功能在分子遺傳學(xué)領(lǐng)域很有用處。分析的功能常用來(lái)研究分離的染色體,有時(shí)也用來(lái)檢測(cè)或定量測(cè)量細(xì)胞表面或內(nèi)部為特異基因所編碼的細(xì)胞分子;分選的功能可用來(lái)分選指定的染色體,然后用來(lái)建立人類染色體DNA 文庫(kù)。

3.1.3
　用于家畜性別的預(yù)選擇　將家畜的X、Y精子分選出來(lái),達(dá)到控制胎畜性別的目的。此外,在精子發(fā)生學(xué)、睪丸瘤、不育癥、藥物對(duì)精細(xì)胞的干擾等研究中,都可使用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行定量研究。

3.1.4
　在微生物學(xué)中的應(yīng)用　流式細(xì)胞技術(shù)在真核細(xì)胞生物學(xué)方面,特別是哺乳類細(xì)胞學(xué)方面有重要貢獻(xiàn),在微生物學(xué)方面的應(yīng)用則發(fā)展相對(duì)較晚。實(shí)際上,微生物學(xué),尤其是細(xì)菌學(xué)當(dāng)前面臨的一些問(wèn)題,特別是需要對(duì)大數(shù)量細(xì)菌進(jìn)行逐個(gè)的快速多參數(shù)精確測(cè)量時(shí),流式細(xì)胞術(shù)很適合解決此類問(wèn)題。已發(fā)表的論文多數(shù)是針對(duì)酵母菌和各類細(xì)菌的測(cè)量與分析。酵母菌的測(cè)量在技術(shù)上比較簡(jiǎn)單,它自身體積大,其DNA 含量約為人類二倍體細(xì)胞DNA 含量的1/ 200。已用定量DNA、RNA 和光散射方法研究酵母菌的細(xì)胞周期。用同樣方法和目的,也對(duì)原生生物、藻類和霉菌類以及各種重金屬對(duì)其的影響進(jìn)行研究。另外用FITC 結(jié)合的抗血清可作種系鑒別,應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)已能代替臨床上經(jīng)典的費(fèi)時(shí)繁瑣的細(xì)菌抗生素敏感試驗(yàn)和傳染活性的測(cè)定。在工業(yè)中,流式細(xì)胞術(shù)可用于快速微生物鑒定,如對(duì)飲用水及原油中的微生物學(xué)鑒定與控制。

3.1.5 　在細(xì)胞周期研究中的應(yīng)用　在生物細(xì)胞核中,DNA 含量并非恒定,隨細(xì)胞增殖周期時(shí)相不同而發(fā)生變化。G0 期是第一次細(xì)胞分裂完成后進(jìn)入第二次分裂開始前的階段。G0 期細(xì)胞是不參與細(xì)胞增殖的一群細(xì)胞,為靜止期細(xì)胞,其細(xì)胞DNA 含量為較恒定的二倍體(diploid) 。G1 期指第二次分裂開始到本次DNA 復(fù)制之前的過(guò)程,此期主要功能是積累能量和原料為DNA 的復(fù)制做準(zhǔn)備,故又稱DNA 合成前期。G1 期細(xì)胞具有增殖活性,開始有RNA 的合成;G0 期和Gl 期是細(xì)胞處于周期過(guò)程中兩種不同功能狀態(tài)時(shí)相的細(xì)胞,不能視為同一細(xì)胞,但就DNA 含量而言,兩者相同,均為二倍體DNA 含量。S 期又稱DNA 合成期,合成及復(fù)制DNA。當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入S 期后,DNA 含量值逐漸從二倍體～四倍體增加,直到細(xì)胞DNA 倍增結(jié)束,進(jìn)入G2 期。G2 期指從DNA 復(fù)制完成到有絲分裂開始的時(shí)間區(qū)間,又稱DNA 合成后期或有絲分裂前期,此期合成大量蛋白質(zhì),為M期的細(xì)胞分裂做準(zhǔn)備。經(jīng)過(guò)G2 期后細(xì)胞最終進(jìn)入M期,即有絲分裂期。在M期分裂為兩個(gè)子細(xì)胞之前,G2 期和M期的DNA 含量均為恒定的四倍體細(xì)胞群。FCM分析細(xì)胞周期與DNA 倍體時(shí),需對(duì)DNA進(jìn)行染色。DNA 熒光染料與細(xì)胞DNA 雙鏈的結(jié)合有一定量效關(guān)系,即DNA 含量的多少與PI 結(jié)合量成正比,因此通過(guò)熒光強(qiáng)度可以反映細(xì)胞內(nèi)DNA 的含量。

3.2 　流式細(xì)胞術(shù)在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用
3.2.1
　在免疫學(xué)中的應(yīng)用　隨著單克隆抗體技術(shù)、熒光色素化學(xué)等技術(shù)的發(fā)展,流式細(xì)胞術(shù)成為當(dāng)代新技術(shù)的“雜交體”。正像免疫學(xué)作為一種不斷發(fā)展的學(xué)科和技術(shù)手段延伸到生物、醫(yī)學(xué)及其他領(lǐng)域一樣,流式細(xì)胞術(shù)也以它的快速、靈活和定量的特點(diǎn),廣泛地被應(yīng)用于免疫理論研究和臨床實(shí)踐應(yīng)用的各方面,所以有人稱之為現(xiàn)代免疫技術(shù)基石之一。尤其同單克隆抗體結(jié)合應(yīng)用,在免疫分型、分選、腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)督、機(jī)體免疫狀態(tài)的監(jiān)測(cè)、免疫細(xì)胞的系統(tǒng)發(fā)生及特性研究等方面都起著相當(dāng)重要的作用。隨著細(xì)胞學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)研究發(fā)展的需要、流式細(xì)胞測(cè)定技術(shù)也不斷得到充實(shí)和完善。它不僅在功能上作為熒光顯微鏡的補(bǔ)充,而且因具備二者的全部功能和特點(diǎn),從而在免疫及有關(guān)各學(xué)科領(lǐng)域發(fā)揮出更重要的作用。

20 世紀(jì)80 年代中期,國(guó)際上提出的白血病MIC分型法,標(biāo)志著流式細(xì)胞儀及免疫分型在白血病診斷中的廣泛應(yīng)用。我國(guó)自80 年代中期引進(jìn)該儀器,90 年代迅速發(fā)展,現(xiàn)在已得到普遍應(yīng)用。這期間免疫標(biāo)記方法已發(fā)生很大的變化,由開始的主要采用間接免疫熒光標(biāo)記法到直接免疫熒光標(biāo)記法,從單色或雙色到利用CD45 抗體標(biāo)記設(shè)門法進(jìn)行多色免疫標(biāo)記,使免疫分型的準(zhǔn)確性得到很大的提高,現(xiàn)在已成為診斷白血病不可缺少的工具。同時(shí)淋巴瘤的免疫分型與白血病免疫分型一樣也已得到廣泛開展。在獲得性免疫缺陷綜合癥和“非典”的研究與治療中FCM也發(fā)揮極大的作用。它通過(guò)對(duì)外周血中的CD4 + T 淋巴細(xì)胞進(jìn)行絕對(duì)記數(shù),來(lái)反映病情進(jìn)展及監(jiān)測(cè)療效。

3.2.2 　流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)上的應(yīng)用　利用FCM進(jìn)行細(xì)胞周期分析、DNA
倍體分析、定量分析檢測(cè)細(xì)胞增殖標(biāo)志物、細(xì)胞表面標(biāo)志、癌基因蛋白產(chǎn)物、耐藥蛋白、細(xì)胞凋亡等,從而獲得組織形態(tài)學(xué)方法難以得到的信息,可為腫瘤的臨床診斷、治療和預(yù)防提供幫助。對(duì)腫瘤細(xì)胞DNA
含量作定量分析,解析細(xì)胞周期,通過(guò)細(xì)胞異倍體測(cè)定預(yù)測(cè)各種腫瘤的預(yù)后,并能在化療中對(duì)藥物的選擇和放療中強(qiáng)度、時(shí)間的決定等起指導(dǎo)作用。解析抗癌藥物作用機(jī)制,對(duì)癌癥進(jìn)行早期診斷及鑒別良惡性有一定參考價(jià)值。此外,由于FCM對(duì)凋亡、周期蛋白、癌基因及抗癌基因的研究也發(fā)揮著重要作用,近年來(lái)引起腫瘤研究者的極大關(guān)注,已廣泛應(yīng)用于腫瘤基礎(chǔ)和臨床研究中,為腫瘤診斷、療效評(píng)價(jià)和預(yù)后預(yù)測(cè)提供重要參考指標(biāo)。另外,傳統(tǒng)的細(xì)胞形態(tài)學(xué)至今仍是診斷腫瘤的一種重要的手段。多年來(lái),細(xì)胞學(xué)工作者就設(shè)想使腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷自動(dòng)化,流式細(xì)胞術(shù)的問(wèn)世,使細(xì)胞學(xué)檢查自動(dòng)化的宿愿如愿以償,并已廣泛應(yīng)用于腫瘤臨床細(xì)胞學(xué)的診斷研究。
大量的臨床應(yīng)用表明,流式細(xì)胞術(shù)對(duì)腫瘤細(xì)胞學(xué)的診斷正確率已達(dá)常規(guī)細(xì)胞學(xué)診斷水平。腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐受性是腫瘤治療的主要障礙。腫瘤細(xì)胞的耐藥性可分為原發(fā)耐藥和繼發(fā)耐藥,前者在化療前就存在于腫瘤細(xì)胞中,與用藥無(wú)關(guān),后者是由化療藥物誘導(dǎo)產(chǎn)生的,即在藥物使用前對(duì)藥物敏感,而在用藥之后產(chǎn)生耐藥。繼發(fā)耐藥根據(jù)耐藥譜的不同又可分為原藥耐藥(PDR) 和多藥耐藥(MDR) 。MDR 相關(guān)蛋白包括P 糖蛋白、多藥耐藥相關(guān)蛋白等。它們都屬于ATP 酶活性轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,均是通過(guò)藥物外排泵的作用降低細(xì)胞中藥物的聚集。因此應(yīng)用FCM 檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的多藥耐藥相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,對(duì)監(jiān)測(cè)臨床腫瘤化療效果及藥物的選擇有一定意義。

3.2.3
　在血液學(xué)研究中的應(yīng)用　除上述FCM在白血病及淋巴瘤的免疫分型應(yīng)用之外,它在血液學(xué)研究中有廣泛的用途。如血小板記數(shù)、血小板自身抗體測(cè)定、血小板膜表面糖蛋白分析、血小板活化分析等。紅細(xì)胞表面相關(guān)免疫球蛋白測(cè)定、紅細(xì)胞血型抗原分析等。

3.3 　流式細(xì)胞術(shù)新技術(shù)的應(yīng)用
3.3.1
　液相芯片技術(shù)　生物芯片技術(shù)是近年來(lái)隨著人類基因組計(jì)劃和蛋白質(zhì)組計(jì)劃的進(jìn)展在生命科學(xué)領(lǐng)域中迅速發(fā)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已被大家所熟知。將生物芯片技術(shù)和FCM有機(jī)結(jié)合在一起,把不同生物探針(核酸、蛋白等)
標(biāo)記在各種有熒光的微球上,以熒光標(biāo)記微球作為反應(yīng)載體在液相系統(tǒng)中完成生物學(xué)反應(yīng),即為流式細(xì)胞術(shù)液相芯片技術(shù)。它組成由微球體+ 探針+ 目的分子+ 報(bào)告分子的一種簡(jiǎn)單反應(yīng)模式。可以在同一液相中同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目的分子。如對(duì)血液中多種白細(xì)胞介素檢測(cè)。

3.3.2 　定量流式細(xì)胞分析　定量流式細(xì)胞分析(quantitative flow cytometry QFCM)
是指用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞或微粒上標(biāo)記熒光分子的定量分析,從而對(duì)細(xì)胞的生物分子進(jìn)行精確測(cè)量。如每個(gè)分子表達(dá)的平均分子數(shù)、抗原數(shù)等。定量流式細(xì)胞分析不同于以往的相對(duì)熒光強(qiáng)度或陽(yáng)性細(xì)胞百分率測(cè)量,它更為準(zhǔn)確、靈敏。為FCM的發(fā)展趨勢(shì)。如在獲得性免疫缺陷綜合癥和“非典”的研究與治療中,對(duì)外周血中的CD4 + T 淋巴細(xì)胞進(jìn)行絕對(duì)記數(shù),來(lái)反映病情進(jìn)展及監(jiān)測(cè)療效�？傊�,流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用極為廣泛,本文所介紹的也只是其中一部分。隨著當(dāng)今各項(xiàng)科學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展,流式細(xì)胞術(shù)會(huì)有更加廣闊的應(yīng)用前景。

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