電泳Marker問題集錦

Q：為什么marker條帶非常模糊，無(wú)法辨別具體條帶？ 
A：出現(xiàn)上述情況，可能有以下幾個(gè)原因： 
1. marker條帶出現(xiàn)了降解。請(qǐng)確保在使用過程中避免核酸酶污染； 

2.  電泳緩沖液陳舊。電泳緩沖液多次使用后，離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；

3.  電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過20V/cm，溫度應(yīng)低于30℃；

4. marker上樣量過多。請(qǐng)根據(jù)說(shuō)明書選用合適上樣量；

5. 凝膠質(zhì)量不好。建議使用質(zhì)量較好的瓊脂糖；此外，凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致條帶模糊。 

Q：為什么marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則的條帶（如啞鈴狀等）？ 
A：出現(xiàn)上述情況，多與以下幾個(gè)原因有關(guān)： 

1.  電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低，pH值上升，緩沖能力減弱，從而影響電泳效果，建議經(jīng)常更換電泳緩沖液；
2.  電泳條件不合適。電泳時(shí)電壓應(yīng)不超過20V/cm，電壓太高可能也會(huì)導(dǎo)致marker條帶出現(xiàn)不規(guī)則現(xiàn)象。此外，凝膠質(zhì)量差以及凝膠冷卻時(shí)凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致該現(xiàn)象出現(xiàn)。 

Q：為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶？ 
A：出現(xiàn)上述情況可能是：
1. marker上樣量較低，可適當(dāng)增加上樣量；
2. 凝膠質(zhì)量較差或凝膠凝固不均勻也會(huì)導(dǎo)致電泳條帶弱或根本沒有條帶；
3. 電泳時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致marker條帶跑出凝膠，可縮短電泳時(shí)間，降低電壓，增加凝膠濃度。 

Q：為什么marker缺帶？ 
A：對(duì)于含有較小片段的marker，如果出現(xiàn)缺帶現(xiàn)象，可能是因?yàn)椋?
1.   小條帶跑出凝膠或分子量大小非常相近的條帶不易辨認(rèn)所致，可適當(dāng)縮短電泳時(shí)間，降低電壓，同時(shí)增加凝膠濃度；
2.  凝膠中EB含量過低，導(dǎo)致大片段結(jié)合EB量太少或沒有，在紫外光下亮度太低，可適當(dāng)增加EB用量。