阪崎腸桿菌及實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測

一、阪崎腸桿菌是腸桿菌科的一種:

1980年由黃色陰溝腸桿菌更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴(yán)重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和茵血癥，死亡率高達(dá)50% 以上。目前，微生物學(xué)家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報(bào)告表明嬰兒配方粉是目前發(fā)現(xiàn)的主要感染渠道。阪崎腸桿茵的生物學(xué)性狀及其對人群的健康危害受到人們的關(guān)注并被報(bào)告。例如，味全配方奶粉2008年年10月份被檢出含有致病菌阪崎腸桿菌。

阪崎腸桿菌是奶粉(乳)制品中新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。由其引發(fā)的嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥及壞死性結(jié)腸炎散發(fā)和暴發(fā)的病例已在全球相繼出現(xiàn)。多份研究報(bào)告表明嬰兒配方奶粉是當(dāng)前發(fā)現(xiàn)致嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥和壞死性結(jié)腸炎的主要感染渠道,在某些情況下，由阪崎腸桿菌引發(fā)疾病而導(dǎo)致的死亡率可達(dá)40%～80%。阪崎腸桿菌已引起世界多國相關(guān)部門的重視。據(jù)報(bào)道,國外乳業(yè)巨頭曾因此被召回.在美國FDA2002年在本土某一些國際乳業(yè)巨頭生產(chǎn)的嬰兒配方奶粉中檢出阪崎腸桿菌后，2003年又一家國際乳業(yè)巨頭公司主動召回在美國生產(chǎn)的一批檢出極微量阪崎腸桿菌的罐裝早產(chǎn)兒特殊配方奶粉，阪崎腸桿菌從此成為世界矚目的焦點(diǎn)。但是國內(nèi)企業(yè)鮮有自查能力,原因是國內(nèi)以前還沒有專門的檢測手段,而去買一套以前國內(nèi)從未有過的檢測設(shè)備也不是馬上就可辦到的。目前,國外 奶粉(乳)制品巨頭卻擁有檢測手段,惠氏中國宣稱保證在中國銷售的每一個產(chǎn)品都經(jīng)過了阪崎腸桿菌的檢測才上市。同樣宣稱設(shè)有此檢測設(shè)備的企業(yè)還有美贊臣中國公司。

在國外發(fā)現(xiàn)的奶粉中的阪崎腸桿菌并非有其特定的區(qū)域局限性，中國奶粉企業(yè)又面臨一項(xiàng)大難題。

2005年5月20日，由中國檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院和天津出入境檢驗(yàn)檢疫局牽頭完成的《奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)在京通過了審定。這項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)的出臺，解決了我國檢測嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌無標(biāo)準(zhǔn)、無檢測方法的問題。10月該標(biāo)準(zhǔn)被實(shí)施。

該標(biāo)準(zhǔn)建立了阪崎腸桿菌的改進(jìn)的傳統(tǒng)檢測方法、普通PCR方法和熒光PCR方法。

據(jù)了解，阪崎腸桿菌是乳制品中近幾年新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。它是存在自然環(huán)境中的一種“條件致病菌”，已被世界衛(wèi)生組織和許多國家確定為引起嬰幼兒死亡的重要條件致病菌，可導(dǎo)致任何年齡層人群的疾病，尤其是對早產(chǎn)兒、出生體重輕的嬰兒或免疫受損嬰兒的威脅最大，嚴(yán)重者可導(dǎo)致敗血癥、腦膜炎或壞死性小腸結(jié)腸炎。

繼美國FDA2002年在本土某一些國際乳業(yè)巨頭生產(chǎn)的嬰兒配方奶粉中檢出阪崎腸桿菌后，2003年又一家國際乳業(yè)巨頭公司主動召回在美國生產(chǎn)的一批檢出極微量阪崎腸桿菌的罐裝早產(chǎn)兒特殊配方奶粉，此后成為世界關(guān)注的焦點(diǎn)。我國在2005年5月通過《奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的審定，對奶粉嚴(yán)查此菌。

今年以來，廣州、中山、汕頭檢驗(yàn)檢疫部門在食品工業(yè)用進(jìn)口奶粉中已多次檢出阪歧腸桿菌。

二、控制阪崎腸桿菌危險(xiǎn)的幾點(diǎn)建議

(1)制定嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌微生物標(biāo)準(zhǔn)，建立有效控制措施，將其危險(xiǎn)性降低到最低。

(2)制定加工、使用和操作嬰幼兒配方食品的導(dǎo)則，研究降低阪崎腸桿菌污染水平的方法，在生產(chǎn)環(huán)境和配方奶粉中降低阪崎腸桿菌的濃度和流行的危險(xiǎn)性；為高危人群生產(chǎn)較大比例的商業(yè)無菌配方替代產(chǎn)品。

(3)制定有效的環(huán)境監(jiān)測計(jì)劃，將腸桿菌科而不是大腸桿菌作為工業(yè)生產(chǎn)線的衛(wèi)生指標(biāo)菌。

(4)建立實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)，對阪崎腸桿菌的來源、傳播途徑等進(jìn)行調(diào)查研究；加強(qiáng)相關(guān)學(xué)科的基礎(chǔ)研究，包括生態(tài)學(xué)、分類學(xué)、菌株毒力等。

(5)用商業(yè)無菌液體或開水沖調(diào)配方食品，喂養(yǎng)嬰幼兒后剩余的調(diào)配食品應(yīng)放置冰箱保存，并在食用前再加熱。我國應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況制定相應(yīng)管理辦法，加強(qiáng)對阪崎腸桿菌的檢測技術(shù)及控制技術(shù)研究，進(jìn)一步完善嬰幼兒配方食品標(biāo)準(zhǔn)，以保證我國廣大嬰幼兒群體的健康與安全。

三、阪崎腸桿菌檢測必備儀器--熒光pcr儀：

實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測系統(tǒng)也叫實(shí)時(shí)熒光定量核酸擴(kuò)增檢測系統(tǒng)(英文全名是Real-time Quantitative PCR Detection System)，簡稱實(shí)時(shí)熒光qPCR，qPCR的核心是實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀及與其配套的檢測分析軟件系統(tǒng)。

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase Chain Reaction簡稱PCR)原理憑借敏感、特異、快速的特點(diǎn)榮獲1993年諾貝爾化學(xué)獎。因其在病原體檢測方面的獨(dú)特優(yōu)勢，因而發(fā)達(dá)國家在相關(guān)方法和儀器方面的研發(fā)非�？欤�成為分子生物學(xué)診斷的主流，至今仍處于學(xué)術(shù)和應(yīng)用前沿，發(fā)展至今已有三代產(chǎn)品：第一代PCR定性檢測技術(shù)及設(shè)備由基因擴(kuò)增熱循環(huán)儀(DNA Thermal Cycler)+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑構(gòu)成；第二代PCR-DNA終點(diǎn)定量技術(shù)及設(shè)備(End-point quantitative PCR detection)由基因擴(kuò)增熱循環(huán)儀+熒光儀+終點(diǎn)定量試劑構(gòu)成，其又分為終點(diǎn)酶免定量(End-point ELISA-PCR)和終點(diǎn)熒光定量(End-point Flour-PCR)兩種；第三代產(chǎn)品為Real-time qPCR-DNA/RNA實(shí)時(shí)熒光定量檢測。

qPCR檢測靈敏度高，檢測線性范圍寬，檢測精度和重復(fù)性好等突出優(yōu)勢，因此被公認(rèn)為目前世界用于臨床及科研的最先進(jìn)核酸分子診斷技術(shù)，被美國FDA承認(rèn)并推崇。檢測項(xiàng)目包括：食物等病原菌以及疾病病毒等病原體如：乙肝病毒HBV DNA，丙肝病毒HCV RNA，艾滋病病毒HIV RNA，沙眼衣原體CT，淋病雙球菌NG，巨細(xì)胞病毒CMV，結(jié)核分支桿菌Mtb、禽流感、阪崎腸桿菌、口蹄疫、新城疫、豬瘟、大腸埃希菌O157∶H7、沙門菌、炭疽芽孢桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等。

PCR儀的應(yīng)用范圍廣，幾乎所有的生命科學(xué)領(lǐng)域都要涉及：食品檢測、臨床檢驗(yàn)、疾病控制、檢驗(yàn)檢疫、科研實(shí)驗(yàn)室、食品安全、化妝品檢測、環(huán)境衛(wèi)生等。國內(nèi)多家試劑廠商生產(chǎn)了包括肝炎、性病、優(yōu)生優(yōu)育、呼吸道疾病、禽流感、阪崎腸桿菌、口蹄疫、新城疫、豬瘟、大腸埃希菌O157∶H7、沙門菌、炭疽芽孢桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等在內(nèi)的數(shù)十種熒光定量PCR試劑盒，購買方便，價(jià)格便宜，并獲得了國家相關(guān)認(rèn)證。

值得一提的是鑒于當(dāng)前流行病的頻發(fā)以及實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)的實(shí)際應(yīng)用，國內(nèi)外已將實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測技術(shù)強(qiáng)制應(yīng)用于相關(guān)行業(yè)并相繼制定了國際、國家、及行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)作為法律依據(jù)。例如：

SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎腸桿菌檢驗(yàn)方法 熒光PCR方法

GB/T 19438.1-2004 禽流感病毒通用熒光RT-PCR 檢測方法

GB/T 19438.2-2004 H5 亞型禽流感病毒熒光RT-PCR 檢測方法

ISO22174-2005 食物病原體PCR檢測方法

相對于價(jià)格十分昂貴的進(jìn)口儀器，選擇質(zhì)量性能與進(jìn)口儀器相當(dāng)而售價(jià)只有進(jìn)口儀器三分之一甚至五分之一的優(yōu)質(zhì)國產(chǎn)熒光定量PCR儀是國內(nèi)絕大多數(shù)用戶的必要選擇，也是國家衛(wèi)生主管部門、國家衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心以及國家食品藥品監(jiān)督管理局提倡的；使用質(zhì)量性能與進(jìn)口儀器相當(dāng)?shù)膰�產(chǎn)熒光定量PCR儀能為國家節(jié)省大量外匯，使更多的用戶能夠擁有先進(jìn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)和設(shè)備，同時(shí)還能促進(jìn)國產(chǎn)儀器的技術(shù)進(jìn)步、民族產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，利國利民。

西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL988型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀經(jīng)過國家藥監(jiān)局指定的、具有國家質(zhì)量檢驗(yàn)檢疫局認(rèn)定的具有CNAL全球互認(rèn)檢測資質(zhì)的檢測中心檢測合格，性能達(dá)到同類產(chǎn)品國際先進(jìn)水平，并通過兩家國家藥物臨床基地臨床試驗(yàn)，獲得了國家食品藥品監(jiān)督管理局SFDA核發(fā)的醫(yī)療器械注冊證，并符合國家衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范》和《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》。

2005年至今我國科研人員圍繞著阪崎氏腸桿菌的分類、致病機(jī)理、危害評估、減少污染措施、檢測方法儀器和標(biāo)準(zhǔn)等進(jìn)行了研究，相關(guān)研究論文包括：

阪崎腸桿菌的生物學(xué)性狀與健康危害，裴曉燕，劉秀梅， 中國疾控制中心營養(yǎng)與食品安全所

乳制品中的阪崎腸桿菌可致嬰兒死亡，中國食品產(chǎn)業(yè)網(wǎng) 2008年5月28日10:56

乳品檢測中實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀的研制，彭年才，蘇明權(quán)，張鎮(zhèn)西，中國乳品工業(yè)，CN23-1177/TS200705：62-64；

乳制品中阪崎腸桿菌的快速檢測，彭年才，李明，食品安全導(dǎo)刊，CN11-5478/R 2008.07；

嬰兒奶粉中阪崎腸桿菌及其檢測，彭年才，張鎮(zhèn)西，蘇明權(quán)，中國乳業(yè)，CN 11-4768/S，2008.08。

淺析乳品中高危害食品源性致病菌阪崎腸桿菌的快速檢測，彭年才 內(nèi)蒙古乳業(yè) P18-20, 2008，03

轉(zhuǎn)自：