SRSV (Small round structured Virus) 小圓結(jié)構(gòu)病毒的離心分離

SRSV會導(dǎo)致食物中毒，癥狀：腹瀉，嘔吐，發(fā)燒等

設(shè)備：1. 通用臺式或立式高速冷凍離心機（有15ml 角轉(zhuǎn)頭及1.5ml 微量轉(zhuǎn)頭）
          2. 超速離心機：Hitachi CS150GXL微量超速離心機S52ST甩平轉(zhuǎn)頭，4×5mlPA管，或落地式超速離心機CP70MX，日立P40ST轉(zhuǎn)頭，6×13ml薄壁PA管或P65ST轉(zhuǎn)頭，4×5ml薄壁PA管，
分離步驟：
1．病毒性腸炎病人糞便或感染病毒的動物、水產(chǎn)品的組織1g－2g，加10ml 純水放入15ml PP管
2．4000xg，4℃離心30分
3．去沉淀，上清液加入HCFC141b攪拌2分鐘
4．2000xg，4℃離心30分
5．去沉淀，上清液用于超速離心。
6．1.2ml，30％（w/w） 蔗糖液置于5ml 管下部，上部用（5）上清液加至距管口3mm（約3.6ml）或其他容量離心管按比例配置梯度液和樣品
7．超速離心純化：35,000rpm－38,000rpm (RCFmax約12,470xg－147,000xg)，4℃，4－3小時，加速“5”，減速“7”
8．超速離心后移去上清液及30％蔗糖液，小心地吸去沉淀上部殘液（注意不要觸及沉淀�。�
9．沉淀加36ul 純水用石蠟封口，直立4℃冰箱中保存過夜。
10．次日，取出，振蕩30分鐘，移入1.5ml eppendorf 管
11．高速離心機15000rpm ，4℃，30分
12．病毒在上清液中�？扇�1—2ul 上清液負(fù)染后上透射電鏡觀察（100KV，×40000）SRSV為小球形，直徑約20—30nm。