采用UPLC/Xevo G2 QTof對1μM維拉帕米進(jìn)行快速而靈敏的體外代謝物鑒定

瀏覽次數(shù)：2934　發(fā)布日期：2011-5-5　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

目的

使用ACQUITY UPLC^®／Xevo™ G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)及MetaboLynx™ XS應(yīng)用管理軟件，鑒定通過人肝微粒體體外孵育而獲取的1 μM維拉帕米的代謝物。

背景

近年來，隨著越來越多的一線藥品因存在安全性顧慮而退出市場，人們對藥品研發(fā)過程中的藥物代謝和毒性研究給予了更多的關(guān)注。如今，在藥物發(fā)現(xiàn)和研制階段提早進(jìn)行藥物代謝研究的趨勢已比較明顯。普遍的做法是對母體藥物進(jìn)行體外代謝物研究，以便在藥品開發(fā)早期迅速確定其弱點。

在藥物發(fā)現(xiàn)階段進(jìn)行代謝物鑒定的一項挑戰(zhàn)是：需要提供快速而通用的方法，并且該方法應(yīng)足夠靈敏，以使體外孵育研究可在低μM濃度水平下進(jìn)行，從而使其更接近于化合物的體內(nèi)作用情況。

一項典型的體外代謝研究還包括分析母體藥物的代謝速率和途徑。此類研究的理想分析方案需提供在模擬體內(nèi)條件的底物濃度下對代謝物進(jìn)行檢測的分析速度和靈敏度。

利用與UPLC/MS^E聯(lián)用的Xevo G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)，體外代謝物研究可在低μM水平下進(jìn)行，同時具有較好的速度、靈敏度和選擇性。

圖1. 人肝微粒體維拉帕米（1μM）的孵育結(jié)果顯示在MetaboLynx瀏覽器中。

解決方案

將濃度為1 μM的維拉帕米與人肝微粒體在37°C下進(jìn)行孵育，并分別在 0、15、30、60、120和 240分鐘時加入等體積的冷乙腈終止反應(yīng)。對樣品進(jìn)行離心，并取上清液直接進(jìn)樣。

采用沃特世ACQUITY UPLC^®系統(tǒng)，ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱（1.7 μm、2.1 x 100 mm），進(jìn)行色譜分離。流動相由0.1%甲酸水溶液（A）和乙腈（B）組成，進(jìn)樣量為5.0 μL。在ESI正離子模式下，使用Xevo G2 QTof質(zhì)譜儀采用UPLC/MS^E技術(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，這樣一次進(jìn)樣即可同時獲取母離子和產(chǎn)物離子的數(shù)據(jù)。

MetaboLynx XS應(yīng)用管理軟件用于進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘，結(jié)果顯示在MetaboLynx瀏覽器中（如圖1所示）。產(chǎn)物離子信息同時進(jìn)行處理，并顯示在MetaboLynx瀏覽器中的碎片分析窗口內(nèi)（圖2）。通過對多個孵育時間點的樣品進(jìn)樣分析，母體藥物的清除曲線和代謝物的形成曲線可在同一次試驗中同時獲�。ㄈ鐖D3所示）。

圖2. 碎片分析窗口中所顯示的MS/MS信息。

圖3. 維拉帕米的清除曲線（3A）及其代謝物的形成曲線（3B）。

通過采用UPLC/MS^E數(shù)據(jù)采集策略，再加上具有化學(xué)智能的MetaboLynx XS數(shù)據(jù)處理工作流程，只需進(jìn)行一次液相色譜進(jìn)樣即可快速完成所有代謝物的鑒定工作。通過在多個時間點進(jìn)樣，可比較容易地獲取低濃度（μM）孵育水平下目標(biāo)藥物的代謝速率和途徑。因此，產(chǎn)能最大化的目標(biāo)即可輕松實現(xiàn)。

總結(jié)

這個應(yīng)用表明：通過使用配備UPLC/MS^E和MetaboLynx XS工作流程的Xevo G2 QTof質(zhì)譜系統(tǒng)，體外代謝物研究可在低濃度（μM）水平下進(jìn)行，同時具有較好的速度、靈敏度和選擇性。

Xevo G2 QTof系統(tǒng)及其創(chuàng)新型QuanTof™和Engineered Simplicity™技術(shù)，與ACQUITY UPLC系統(tǒng)實現(xiàn)了完美結(jié)合。它是目前最靈敏的臺式oaTOF儀器，擁有1 ppm的準(zhǔn)確質(zhì)量測定能力，數(shù)據(jù)采集速度高達(dá)每秒20張光譜圖。

來源：沃特世科技（上海）有限公司
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