ACQUITY UPLC®-Xevo TQ-S 同時測定豬尿液中的 21 種 β- 受體激動劑

ACQUITY UPLC®-Xevo TQ-S 同時測定豬尿液中的 21 種 β- 受體激動劑
王少珍 沃特世科技（上海）有限公司

今年 3 月，瘦肉精事件引發(fā)全國拉網(wǎng)式排查，瘦肉精事件鬧得沸沸揚揚， 10 年間瘦肉精屢禁不絕，添加瘦肉精喂出來的豬不僅顏色光亮，而且可以增加豬的瘦肉率，現(xiàn)在人們都關(guān)注身材，不吃肥膩的肉，這也導(dǎo)致飲食習(xí)慣吃瘦肉，而添加瘦肉精的豬肉正好符合當(dāng)今人們的飲食習(xí)慣，瘦肉精事件一出大家都在徘徊這肉還吃不吃？

簡介
瘦肉精：一類動物用藥的統(tǒng)稱，任何能夠促進瘦肉生長、抑制動物脂肪生長的物質(zhì)都可以叫做 “ 瘦肉精 ” 。 目前，能夠?qū)崿F(xiàn)這種功能的物質(zhì)是一類叫做 β- 興奮劑的藥物。與傳統(tǒng)瘦肉精鹽酸克倫特羅同屬 “ 腎上腺受體激動劑 ” 的萊克多巴胺等同類藥物同樣也能提高豬的瘦肉率。鹽酸克倫特羅的檢測方法主要有酶聯(lián)免疫吸附法（ ELISA ）、膠體金免疫層析法、高效液相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法及液質(zhì)聯(lián)用法。國家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 5009.192-2003 動物性食品中克倫特羅殘留量的測定中規(guī)定方法為氣相色譜 - 質(zhì)譜法（ GC-MS ）、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫法，其方法檢出限均為 0.5ug/kg 。 SN/T 1924—2007 進出口動物源食品中克倫特羅、萊克多巴胺、沙丁胺醇、特布他林殘留量的檢測方法采用 LC/MS/MS 法，該方法具有高靈敏度等優(yōu)點被普遍使用。本文使用 UPLC/XEVO TQ-S 對豬尿液中的 β- 受體激動劑進行分析。

實驗方法
UPLC 條件
LC 系統(tǒng)： ACQUITY UPLC®
運行時間： 10min
色譜柱： ACQUITY® BEH C18 1.7μm ， 2.1mm x 100mm
流動相 A ： 0.1% 甲酸水
流動相 B ： 乙腈
流速： 0.40mL/min 


MS 條件
MS 系統(tǒng)： Xevo TQ-S
離子模式： ESI+
毛細管電壓： 3.5kv
源溫度： 150 ℃
霧 化氣溫度： 500 ℃
霧化氣流速： 900L/hr
錐孔氣流速： 20 L/hr

MRM 條件： Quanpedia 數(shù)據(jù)庫
Quanpedia 是沃特世特有的一種可擴展和可搜索的數(shù)據(jù)庫，為您提供 LC/MS/MS 定量方法信息，目前數(shù)據(jù)庫已有超過 1200 種化合物，包括色譜方法、質(zhì)譜方法、定量方法等，您可自由選擇其中的任意化合物或化合物種類自動形成您所需的方法，無需再重新進行方法開發(fā)過程。

下圖為數(shù)據(jù)庫得到的方法信息：

自動生成 MRM 方法：

樣品制備
樣品制備參照 GB/T 22286-2008 《動源性食品中多種 β- 受體激動劑殘留量的測定》進行。
■ 量取 2.0mL 豬尿液 樣 品，加入 8mL 0.2M 的 PH 為 5.2 的乙酸鈉緩沖液，充分混勻
■ 加入 50μLβ-Glucuronidase/aryl sulfatase 混勻，于 37 ℃ 水浴水解過夜
■ 水解液振蕩 15min ，在 5000r/min 條件下離心分離 10min 后，取 4mL 上清液中添加 100uL 10ng/mL 的內(nèi)標(biāo)溶液混勻，加入 5mL 0.1M 高氯酸混合均勻，并調(diào)節(jié)溶液 PH 值到 1±0.3 。以 5000r/mim 條件下離心分離 10min 后，移取上清液并用 10M 的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié) PH 值到 11 。
■ 加入 10mL 飽和氯化鈉溶液和 10mL 異丙醇 - 乙酸乙酯（ 6:4 ）混合溶液，離心分離后取有機相，在 40 ℃ 水浴下用氮氣將其吹干
■ 提取殘渣中加入 5mL 0.2M 乙酸鈉緩沖液（ PH5.2 ），超聲混勻溶解殘渣
■ 樣 品 凈 化（如下 圖 所示），使用 Oasis MCX （ 3cc/60mg ）小柱
■ 凈 化后的洗脫液用氮氣吹干，用流 動 相溶解定容至 1.0mL ，過 0.22μm 濾膜，待進樣分析

下圖為數(shù)據(jù)庫得到的方法信息：
固相提取凈化過程 Oasis MCX （ 3cc/60mg ）：

實驗結(jié)果與討論
本方法才用一次進樣同時監(jiān)測豬尿液樣品中的 21 種 β- 受體激動劑進行檢測，在靈敏度、分離度方面獲得滿意的結(jié)果。與常規(guī)的串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀不同的是， Xevo TQ-S 為您提供最好的定量數(shù)據(jù)的同時，還為您提供高質(zhì)量的光 MS/MS 信息。對豬尿液中含 0.5ug/L 的受體激動劑樣品，啟用 PICs （子離子確認掃描）功能，可在不影響 MRM 定量的同時得到各化合物子離子掃描圖，與標(biāo)樣子離子圖進行匹配，對樣品中陽性結(jié)果定性起到幫助判斷的作用。

 

結(jié)論
本方法采用多離子反應(yīng)監(jiān)測（ MRM ）方式對 21 種 β- 受體激動劑進行檢測，具有快速、準(zhǔn)確、靈敏度高、分析周期短、適用范圍廣等優(yōu)點。適用各類動物組織或動源性食品等的測定。

IntelliStart 技術(shù)可以使得開發(fā)分析方法過程變成流線型工作流程。這意味著需要更少的時間來開發(fā)方法，大大提高工作效率。強大的 Quanpedia 數(shù)據(jù)庫包含上千種化合物的方法，自動生成方法文件讓你輕松簡單快速應(yīng)對各種突發(fā)事件。

PICs （子離子確認掃描）功能為您提供最好的定量數(shù)據(jù)的同時，還為您提供高質(zhì)量的光譜 MS/MS 信息，對樣品中陽性結(jié)果定性起到幫助判斷的作用。

關(guān)于沃特世公司 ( www.waters.com )

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2010 年沃特世擁有 16.4 億美元的收入和 5,400 名員工，它將繼續(xù)帶領(lǐng)全世界的客戶探索科學(xué)并取得卓越成就。