用于植物油快速質(zhì)控的自動(dòng)計(jì)算法以及品質(zhì)鑒定

對(duì)于雜質(zhì)指示峰，在第4步中，在“輸入公式”窗口中輸入
以下公式：
GT(Impurity[Ratio_IS],0.42)*EQ(Name,”Impurity”)+NEQ(Name,“Impurity”)*-1*50000. 在第7步中，在字段名中輸入“Oly_Impurity”，創(chuàng)建字段“Oly_ Impurity”，以檢驗(yàn)峰面積比(雜質(zhì)峰面積除以標(biāo)記峰面積)是否符合質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

本方法用定時(shí)組功能計(jì)算雜質(zhì)峰的總和：
1. 在“編輯處理方法”窗口中，選擇“定時(shí)組”標(biāo)簽，如圖7所示。
2. 在“名稱”字段中輸入雜質(zhì)名稱，在“開(kāi)始時(shí)間”字段中輸入“3”，在“結(jié)束時(shí)間”字段中輸入“13.6”。
3. 勾選“不包括已知峰”字段。在處理方法中標(biāo)記選定的標(biāo)記峰和指示峰：
1. 在“編輯處理方法”窗口中選擇“組分”標(biāo)簽。
2. 將保留時(shí)間為9.81 min的峰名稱改為IS，在“峰標(biāo)簽”字段中輸入“標(biāo)記峰”，如圖8所示。
3. 將保留時(shí)間為13.79 min的峰名稱改為3L，在“峰標(biāo)簽”字段中輸入“LLL”。
4. 將保留時(shí)間為14.85 min的峰名稱改為2LO，在“峰標(biāo)簽”字段中輸入“LLO”。
5. 將保留時(shí)間為15.87 min的峰名稱改為2OL，在“峰標(biāo)簽”字段中輸入“OOL ”。
6. 將保留時(shí)間為16.85 min的峰名稱改為OOO，在“峰標(biāo)簽”字段中輸入“OOO”。

在處理方法中創(chuàng)建命名組的步驟：
1. 在“編輯處理方法”窗口中選擇“命名組”標(biāo)簽。
2. 在“名稱”欄中輸入3O、LLL、LLO、OOL和Oly，如圖9所示。
3. 分別將OOO、3L、2LO、2OL和IS從“單峰組分”拖至各自相應(yīng)的命名組中，如圖9所示。創(chuàng)建合格或不合格報(bào)告模板的步驟：
1. 點(diǎn)擊“方法”標(biāo)簽，選擇一份報(bào)告，右擊該報(bào)告；選擇“打開(kāi)”，以顯示“編輯報(bào)告方法”窗口。
2. 在“編輯報(bào)告方法”窗口中選擇“新建”，打開(kāi)“新方法／組”窗口。
3. 選擇“創(chuàng)建新報(bào)告方法”，勾選“使用報(bào)告方法／組向?qū)А边x項(xiàng)；然后點(diǎn)擊“確定”，打開(kāi)“報(bào)告方法模板向?qū)А薄?BR>4. 選擇“單個(gè)報(bào)告”，然后點(diǎn)擊“下一步”，打開(kāi)“新方法向?qū)А贝翱凇?BR>5. 在報(bào)告類(lèi)型中選擇“單個(gè)”，然后點(diǎn)擊“完成”，顯示一個(gè)報(bào)告方法模板。
6. 在色譜圖上右擊，選擇“屬性”，打開(kāi)“色譜圖屬性”窗口(圖10)。
7. 選擇“峰標(biāo)簽”，勾選“僅使用峰標(biāo)簽”，然后點(diǎn)擊“確定”。
8. 右鍵單擊“表”，選擇“屬性”，打開(kāi)“表屬性”窗口。
9. 選擇“峰”標(biāo)簽，勾選“峰組”。
10. 點(diǎn)擊“表”標(biāo)簽，然后在樹(shù)形結(jié)構(gòu)中點(diǎn)擊所需的峰。雙擊每個(gè)指示峰，以將相應(yīng)的自定義字段添加到結(jié)果表格中，如圖11所示。
11. 點(diǎn)擊“確定”，輸入該報(bào)告模板的名稱(例如，此處顯示的名稱是“特級(jí)天然橄欖油質(zhì)控報(bào)告”)，然后在工具欄中點(diǎn)擊“保存”。

結(jié)果和討論
不使用鹵代溶劑做流動(dòng)相的普通高效液相色譜法很難分離植物油的主要組分——甘油三酸酯。圖12為普通高效液相色譜法(2根5μm粒徑顆粒填充的150mm長(zhǎng)的C18柱，蒸發(fā)光散射檢測(cè)器ELSD)得到的大豆油的典型色譜圖，使用乙腈和二氯甲烷作為流動(dòng)相，實(shí)現(xiàn)該分離需要60多分鐘。由于二氯甲烷在240nm以內(nèi)具有紫外吸收，這會(huì)干擾甘油三酸酯的紫外吸收(最大波長(zhǎng)吸收值約210nm)，因此使用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(ELSD)進(jìn)行檢測(cè)。

ACQUITY UPLC系統(tǒng)的設(shè)計(jì)特點(diǎn)是使用小顆粒裝填技術(shù)的高效色譜柱，以進(jìn)行更快速、更靈敏和更高分離度的分離。UPLC的溶劑傳送系統(tǒng)能承受高達(dá)15,000 psi的背壓，因此能夠使用2-丙醇等高黏度溶劑進(jìn)行植物油分析。由于2-丙醇對(duì)植物油的溶解性好12、低毒，透射度限制低，便于對(duì)甘油三酸酯進(jìn)行紫外檢測(cè)，因此2-丙醇被選作強(qiáng)洗脫液。圖13為關(guān)于同一大豆油樣品的10張疊加的紫外色譜圖說(shuō)明UPLC法的重現(xiàn)性，此分離使用1.7μm粒徑的2.1 x 150mm的 BEH C18色譜柱，乙腈/2-丙醇作為流動(dòng)相，整個(gè)運(yùn)行時(shí)間縮短為22分鐘。圖12和圖13比較，具有相似的甘油三酸酯峰型，但UPLC法具有更高的分離度，更短的運(yùn)行時(shí)間。數(shù)據(jù)表明不使用致癌溶劑作為流動(dòng)相，使用 UPLC分離植物油中的組分具有明顯優(yōu)勢(shì)。用于植物油分析的乙腈/2-丙醇流動(dòng)相的UPLC系統(tǒng)可使用PDA、ELSD和MS檢測(cè)器，不像其他用于普通高效液相色譜法的溶劑。一次進(jìn)樣便可得到多種數(shù)據(jù)類(lèi)型，并可以產(chǎn)生可重現(xiàn)的指紋圖譜數(shù)據(jù)7，通過(guò)質(zhì)譜法鑒別甘油三酸酯組分10，并用PDA多波長(zhǎng)掃描測(cè)定植物油的氧化程度8。目前已知植物油具有特征的甘油三酸酯比，這對(duì)植物油指紋圖譜5-8的鑒別很有用。如圖14-16所示，核桃油、葡萄籽油、芝麻油、特級(jí)天然橄欖油A、特級(jí)天然橄欖油B、榛子油、茶籽油、玉米油、加拿大低酸油、高油酸葵花籽油和普通葵花籽油的紫外色譜圖證實(shí)，每種油樣品都具有獨(dú)特的色譜類(lèi)型，即相對(duì)峰強(qiáng)度。

為了高效使用峰強(qiáng)度比進(jìn)行品牌質(zhì)控和質(zhì)量鑒定，Empower 2軟件的自定義字段計(jì)算功能可根據(jù)用戶設(shè)定的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)將原始色譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為合格或不合格報(bào)告。以特級(jí)天然橄欖油A為例說(shuō)明該改進(jìn)的方法。圖17為特級(jí)天然橄欖油A的疊加紫外色譜圖和峰面積。甘油三酸酯的峰面積從最強(qiáng)峰(OOL)到最弱峰(LLL)其RSD值(n=6)<0.9%。共有20多個(gè)可見(jiàn)峰，任一峰都能被用作標(biāo)記峰或指示峰，用以計(jì)算峰面積比。為了便于討論，將之前確定的甘油三酸酯的峰OOO、OOL、LLO和LLL選作指示峰10，將僅出現(xiàn)在橄欖油產(chǎn)品中、通過(guò)紫外檢測(cè)觀察到的保留時(shí)間為9.8分鐘的強(qiáng)峰選作標(biāo)記峰13。由于大多數(shù)廉價(jià)的蔬菜油和降解油具有很多保留時(shí)間低于13.6分鐘的其它強(qiáng)峰9，因此可用定時(shí)組功能(圖7)創(chuàng)建雜質(zhì)指示峰，以監(jiān)測(cè)是否存在污染。該雜質(zhì)指示峰是指標(biāo)記峰之外的保留時(shí)間介于3-13.6分鐘的所有峰的總和。通過(guò)創(chuàng)建自定建自定義字段“Ratio_IS”(圖4)，可用Empower 2軟件自動(dòng)計(jì)算峰面積比(指示峰面積除以標(biāo)記峰面積)。表1總結(jié)了峰面積比的結(jié)果以及STDEV值�！胺迕娣e比±3xST-DEV”被用作每個(gè)指示峰的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。由于地理和其它種植條件的差異，植物油的某一特定類(lèi)型會(huì)存在差異。該數(shù)值在比較其它植物油樣品是否符合基于特定油品的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)方面具有極大的價(jià)值。