重組細(xì)胞因子和蛋白-常見問題解答(FAQ)

1．PeproTech細(xì)胞因子和蛋白產(chǎn)品的穩(wěn)定性如何？
      答：除非在產(chǎn)品說明書中特別注明，PeproTech的所有產(chǎn)品均為凍干粉，它們在室溫條件下非常穩(wěn)定(至少1個月)。盡管如此，我們還是建議您在收到我們的產(chǎn)品后保存于-20oC，以確保蛋白100%的活性。

      對于大多數(shù)蛋白，重懸后在4oC僅能短期保存(約1周)。如想長期保存，請先配制成稀釋液(其中必須含有載體蛋白，如0.1% BSA，5%HSA，或10% FBS)，然后分裝凍存于-20oC或-80oC。一定要避免反復(fù)凍融，因每次凍融均會引起蛋白的部分失活。

      具體、詳細(xì)的重懸和溶解方法請。

2．為什么有時在管中看不到細(xì)胞因子或蛋白的凍干粉？
      答： 與市場上的許多蛋白產(chǎn)品不同，PeproTech的產(chǎn)品中均不含載體蛋白或其它添加物(如牛血清白蛋白(BSA)，人血清白蛋白(HSA)和蔗糖等，并且是以最低含鹽量的溶液進(jìn)行凍干的，因此凍干后常常不能形成白色網(wǎng)架結(jié)構(gòu)，而是微量的蛋白在凍干過程中沉積在管內(nèi)，形成很薄或肉眼不可見的透明蛋白層。

     打開管蓋前，我們建議您在小離心機中快速離心20-30秒，使附著在管蓋或管壁上的蛋白聚集于管底。我們的質(zhì)控步驟保證每管中所含的蛋白量準(zhǔn)確無誤，雖然有時您無法看到蛋白粉末，但管中的蛋白含量仍是非常精確的。

3．ED₅₀和units/mg之間有何關(guān)聯(lián)？
      答： ED₅₀為半數(shù)有效濃度，其定義是可誘導(dǎo)50%最大反應(yīng)的細(xì)胞因子濃度，這種活性表示法僅適用于劑量反應(yīng)曲線呈S形的細(xì)胞因子。其實，可以將ED₅₀的值接理解為1unit。如某種細(xì)胞因子或蛋白的ED₅₀為1ng/ml，那么1ng/ml即可看作是1unit。那么我們也不難理解，1mg (1x10⁶ng) 該細(xì)胞因子或蛋白中應(yīng)含1x10⁶/1 = 10⁶units.

      ED₅₀(ng/ml)轉(zhuǎn)化為units/mg的公式如下：

4．如何確定細(xì)胞因子的種屬交叉活性？
     答：1) 除少數(shù)例外，大多數(shù)人類細(xì)胞因子對小鼠細(xì)胞均有活性。2) 許多小鼠細(xì)胞因子也可作用于人類細(xì)胞，但比活性可能低于對應(yīng)的人類細(xì)胞因子。 3) IL-7等為數(shù)不多的人類細(xì)胞因子作用于小鼠細(xì)胞時比對應(yīng)的小鼠細(xì)胞因子活性更強。4) 干擾素，GM-CSF, IL-3和IL-4等細(xì)胞因子種屬特異，對非同源細(xì)胞幾乎沒有活性。5) 相反，成纖維細(xì)胞生長因子(FGFs)和神經(jīng)營養(yǎng)素(neurotrophins)高度保守，在不同動物種屬細(xì)胞上均具有很好的活性。

      當(dāng)然，僅憑以上規(guī)律無法判斷許多其它細(xì)胞因子的交叉反應(yīng)活性。如您在這方面存在疑問，請與PeproTech中國代表處聯(lián)系，電話：0512-6832 5993，Email：china@peprotechasia.com，我們會給您準(zhǔn)確的答復(fù)。

5．到底什么是無動物成分(Animal-Free)的重組蛋白？
      答：誠然，PeproTech生產(chǎn)的重組蛋白均是人或小鼠和大鼠的，又怎么說成是Animal-Free，即無動物成分的呢？真正的原因是：這里的Animal-Free是指在表達(dá)人、小鼠或大鼠的重組蛋白的過程中未使用任何動物來源的材料，而不是指被表達(dá)的重組蛋白是Animal-Free的。我們知道，重組蛋白通常是用大腸桿菌表達(dá)的，而大腸桿菌的培養(yǎng)基中需要添加胰蛋白胨(Trypton)等動物來源的組分，這些組分不可避免的在隨后表達(dá)出來的重組蛋白中摻入諸多不明的動物成分。雖然最后純化出來的重組蛋白的純度可達(dá)98%或99%，但另外1%中很可能含有來自胰蛋白胨的其它動物成分，這些動物成分雖然含量極微，但可能在重組蛋白應(yīng)用于人體或動物時，將其中所含動物病原體(如瘋牛病病毒及其它未知病原體)傳染給人和動物。而且，這些動物成分中的異源蛋白也會引起人和動物的異體排斥或過敏反應(yīng)。因此，當(dāng)重組蛋白在應(yīng)用過程中可能接觸到人體或動物體時(如細(xì)胞治療和動物體內(nèi)實驗等)，請盡量選用Animal-Free的重組蛋白。

      PeproTech的無動物成分重組蛋白是在獨立的完全無動物成分的生產(chǎn)車間中生產(chǎn)出來的，同時生產(chǎn)過程中不會使用到胰蛋白胨等任何含動物成分的培養(yǎng)基或試劑，因此可保證最終的重組蛋白中不含任何動物成分，非常適合于臨床前試驗和動物研究。

      PeproTech的無動物成分產(chǎn)品的產(chǎn)品編號均以AF為前綴。PeproTech現(xiàn)已有44種無動物成分的人、小鼠和大鼠重組蛋白，并在不斷快速增加。而且有些常用的細(xì)胞因子，如人EGF(表皮生長因子)已經(jīng)完全采用無動物成分的生產(chǎn)方式，即不再提供含動物成分的人EGF。