使用超高效合相色譜進行脂溶性維生素膠囊分析

 

 

簡介
脂溶性維生素(FSV)(通常來自充油膠囊、充粉膠囊或壓縮片粒)的分析是一項具有挑戰(zhàn)性的任務(wù)。最常見的情況是，這些配方的分析都采用正相色譜法，使用傳統(tǒng)的正相溶劑(己烷、叔丁醇、乙酸乙酯、二氯甲烷等)，采購和處理的成本相當(dāng)高。用于FSV分析的其它分析色譜技術(shù)包括反相液相色譜法、氣相色譜法、薄層色譜法和比色技術(shù)。超高效合相色譜(UPC^2™)為脂溶性維生素分析提供了一種可行的技術(shù)，它是一種具備成本效益的、可持續(xù)的和綠色環(huán)保的替代技術(shù)，降低了有機溶劑的用量，分析時間快，保持了色譜數(shù)據(jù)的品質(zhì)。使用
ACQUITY UPC²系統(tǒng)分析了一系列FSV配方。被檢驗的配方有：維生素A、維生素A+D3、維生素E，維生素D3、維生素K1和維生素K2，如表1所示。這些實驗的結(jié)果表明，UPC2有可能替代當(dāng)今正在使用的許多分離方法成為唯一的一種技術(shù)。

 

 

實驗
系統(tǒng)： ACQUITY UPC²包括：二元溶劑管理器、樣品管理器
合相管理器、色譜柱管理器、PDA檢測器
色譜柱： ACQUITY UPC² BEH，
3.0 x 100mm，1.7μm
ACQUITY UPC2 HSS C18 SB，
3.0x 100mm毫米，1.8μm
ACQUITY UPC² HSS C18 SB，
2.1 x 150mm，1.8μm
數(shù)據(jù)系統(tǒng)： Empower 3軟件
分離方法： 每種分離方法的詳細(xì)介紹包含在本應(yīng)用文集的單個結(jié)果和討論部分中。

 

樣本制備
充油膠囊(維生素A、A + D3、D3)——去除四種膠囊的外殼并分別溶解于10毫升的異辛烷中，無需進一步前處理。去除單個維生素E膠囊的外殼并溶解于10毫升的異辛烷中，無需進一步預(yù)處理。

 

用異辛烷對八片碾碎的維生素K1片進行超聲處理30分鐘。沉淀后，將一小份萃取液通過一個1.0μm玻璃纖維過濾器直接過濾到樣品瓶中。

 

去除八粒充粉維生素K2的外殼，并用異辛烷進行超聲處理30分鐘。沉淀后，將一小份萃取液通過一個1.0μm玻璃纖維過濾器直接過濾到樣品瓶中。

 

結(jié)果與討論
維生素 A
該維生素A的配方為源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。如圖1所示，維生素A棕櫚酸酯的兩種主要形式(順式和反式異構(gòu)體，分別為1.325分鐘和1.394分鐘)和賦形劑的小峰得以完全分離，并標(biāo)示于圖中，洗脫范圍為2.0分鐘至2.5分鐘。該分離采用梯度模式，二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)在3min內(nèi)從97:3變化到90:10，主動背壓調(diào)節(jié)器(ABPR)壓力為2176 psi，詳細(xì)的參數(shù)如表2所示。使用該分離方法，維生素A乙酸酯、棕櫚酸酯和視黃醇被輕易分離，如圖2所示。

 

 

 

 

 

維生素A + D3
與前例相似，維生素A+D的配方為：源于魚肝油，含豆油、明膠、甘油和水等活性成分。同樣，兩種形式的維生素A棕櫚酸酯(順式和反式異構(gòu)體，分別為2.626分鐘和2.851分鐘)在賦形劑峰之前出峰。為了將維生素D3(VD3，6.862分鐘)從主要賦形劑和配方中所含的其它化合物中完全分離出來(如圖3所示)，需要使用更長的色譜柱來提供足夠的分離效率，才能完成該目標(biāo)。系統(tǒng)具有足夠的靈敏度，可輕松地檢測到維生素D3的峰，如圖3所示。

 

 

該分離采用二氧化碳和甲醇(含0.2%甲酸)進行梯度洗脫，按99:1到90:10的比例在10分鐘內(nèi)完成，詳細(xì)信息如表3所示

 

 

維生素D3
使用與維生素A+D3相同的分離條件(如表3所示)，維生素D3(膽鈣化醇，6.867分鐘)被輕松地從膠囊賦形劑材料(標(biāo)記為主要成分為葵花籽油)中分離出來，如圖4和表3所示。