鹽附子對小鼠的急性神經(jīng)毒性作用的研究

摘要: 目的 研究鹽附子(SAC)對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的急性毒性作用。方法 采用小鼠自發(fā)活動、爬桿、Morris水迷宮試驗,分別設(shè)SAC生藥7. 68、3. 84、1. 92g·kg^-1劑量組, ig給藥,同時設(shè)陰性對照和陽性對照組。單次給藥后15、60min用自發(fā)活動儀測定小鼠在10min內(nèi)自發(fā)活動的次數(shù);單次給藥30min后將小鼠放在爬桿架的玻璃棒上,記錄小鼠爬桿時間;連續(xù)給藥4d,末次給藥后30min進行水迷宮試驗,以小鼠找到隱藏平臺的時間為逃避潛伏期。結(jié)果 SAC高、中、低劑量組的小鼠自發(fā)活動次數(shù)、爬桿時間、逃避潛伏期與對照組相應(yīng)指標(biāo)相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)。結(jié)論 SAC濃度為7. 68、3. 84、1. 92g·kg^-1時,未觀察到其對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的急性毒性作用。

 

關(guān)鍵詞:鹽附子; 自發(fā)活動次數(shù); 爬桿時間; 逃避潛伏期; 神經(jīng)毒性

 

附子Aconitumcarmichaeli為毛莨科植物烏頭子根的加工品,因其附生烏頭得名。附子的毒性成份為烏頭堿,可溶于水與乙醇,毒性極大,人口服0. 2mg即可產(chǎn)生中毒癥狀,其結(jié)晶2～4mg即可致死。鹽附子是泥附子經(jīng)丹巴液鹽浸、曬晾炮制加工而成,是臨床上常用附子的炮制品。為其臨床的安全用藥提供依據(jù),特選用小鼠自發(fā)活動試驗、爬桿試驗、Morris水迷宮試驗,研究了鹽附子的急性神經(jīng)毒性。

 

1 實驗部分

111 試藥、儀器與動物

鹽附子(SAC，生藥1.09 g·ml^-1)為深褐色液體,由泥附子經(jīng)鹽浸炮制加工而成；地西泮注射液(天津金耀氨基酸有限公司，5mg·ml^-1)；氫溴酸東莨菪堿注射液(上海禾豐制藥有限公司，0.3mg·ml^-1)。JXDH-Ⅰ自發(fā)活動儀(河北冀星試驗儀器公司)；Morris水迷宮系統(tǒng)(北京新天地科技有限公司);小鼠爬桿架(自制)。普通級健康成年昆明種小鼠[四川省實驗動物專委會養(yǎng)殖場,生產(chǎn)許可證號SCXK(川)2004-014]共150只，體重20至26g，♀♂兼用。小鼠飼養(yǎng)于中心的普通級小動物房，每籠5只，溫度20℃至26℃，濕度55%±15%，照明時間12h/12h。將小鼠隨機分為陰性對照組、陽性對照組和鹽附子高、中、低劑量組。

112 統(tǒng)計方法

結(jié)果用x±s表示,各組數(shù)據(jù)用SPSS11. 0統(tǒng)計軟件進行單因素方差分析。

1. 3 方法與結(jié)果

11311 自發(fā)活動試驗 小鼠50只,隨機均分為5組。SAC高、中、低劑量組小鼠分別ig生藥7168、3184、1192g·kg^-1陰性對照組給予蒸餾水;陽性對照組給予地西泮注射液5mg·kg^-1。分別于給藥后15、60min測定小鼠10min內(nèi)自發(fā)活動的次數(shù)[1]。表1結(jié)果顯示, SAC高、中、低劑量組小鼠的自發(fā)活動次數(shù)與相應(yīng)的陰性對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)。SAC高劑量組小鼠與中、低劑量組的比較有所減少,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。11312 爬桿實驗 按“1. 3. 1”項方法分組、給藥。試驗前訓(xùn)練小鼠兩天,使其學(xué)會爬桿。給藥30min后,將小鼠放在爬桿架的玻璃棒上,使肌肉處于靜力緊張狀態(tài),記錄小鼠由于肌肉疲勞從棒上跌落的時間,累計3次的爬桿時間作為總的爬桿時間。SAC高、中、低劑量組小鼠的爬桿時間與相應(yīng)的陰性對照組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)。SAC高劑量組小鼠與中、低劑量組的比較有所減少,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。

11313 Morris水迷宮試驗 將Morris水迷宮分為四個象限,平臺置第一象限離水面約1cm處。先將小鼠放在平臺上使其熟悉平臺30 s,再將小鼠從與平臺相對的象限面壁放入迷宮,以小鼠找到隱藏平臺的時間為逃避潛伏期。若120 s小鼠仍找不到平臺,則引導(dǎo)小鼠至平臺上,逃避潛伏期計為120 s。重復(fù)測定1次,取其平均值。除陽性對照組ip氫溴酸東莨菪堿注射液3mg·kg^-1外,其余按“1. 3. 1”項方法分組、給藥,各組均連續(xù)給藥4 d。每次給藥后30min進行水迷宮試驗,取第4天的結(jié)果為正式試驗結(jié)果。結(jié)果顯示, SAC高、中、低劑量組小鼠的逃避潛伏期與相應(yīng)陰性對照組的比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0. 05)。

 

2 討論

附子具有強心、抗炎、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫功能等作用,但又是常見的有毒中藥之一。其主要毒性成分為脂溶性二脂類生物堿,毒性表現(xiàn)為神經(jīng)和心血管系統(tǒng)的嚴(yán)重損害。鹽附子、黑順片、白附片是臨床上常用附子的炮制品,其中又以鹽附子最為常用,故文中選用鹽附子來研究其急性神經(jīng)毒性。鹽附子是附子的粗加工品,其毒性和藥理作用與生附子相比變化不大,故文中試驗結(jié)果也反映了生附子的急性神經(jīng)毒性。實驗采取神經(jīng)行為測試組合來研究鹽附子對小鼠神經(jīng)行為功能的影響。給藥組與陰性對照組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。但鹽附子高劑量組小鼠自發(fā)活動次數(shù)和爬桿時間與其他組比較均有所減少,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。可能原因是鹽附子急性神經(jīng)毒性較低,短期給藥對小鼠自發(fā)活動次數(shù)和爬桿時間影響較小,故在較高的生藥劑量下才出現(xiàn)較小的毒性。試驗結(jié)果顯示,鹽附子生藥濃度為7168、3184、1192g·kg^-1時,未觀察到其對小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的急性毒性作用。