奶粉中亞硝酸鹽檢測方案

繼恒天然曝出乳品原料肉毒桿菌污染之后，又一家新西蘭乳品企業(yè)產(chǎn)品出問題。新西蘭當(dāng)?shù)貢r間 8 月 19 日，中國國家質(zhì)檢總局、新西蘭初級產(chǎn)業(yè)部（MPI）以及新西蘭乳品企業(yè) Westland 均公布，Westland公司生產(chǎn)的 390 公斤乳鐵蛋白檢測出硝酸鹽含量超標，問題產(chǎn)品全部出口中國。

食物中的亞硝酸鹽主要指亞硝酸鈉。亞硝酸鹽能使血液中正常攜氧的低鐵血紅蛋白氧化成高鐵血紅蛋白，因而失去攜氧能力而引起組織缺氧。有文獻稱其半致死量為 22 mg/kg。根據(jù)《GB 2762-2012 食品安全國家標準 食品中污染物限量》的要求，嬰幼兒乳基食品中亞硝酸鹽（以 NaNO2 計）不得超過 2.0 mg/kg。RephiLe 根據(jù)《GB 5009.33-2010 食品安全國家標準 食品中亞硝酸鹽和硝酸鹽的測定》，推出奶粉中亞硝酸鹽檢測方案。

一、實驗原理
將奶粉試樣經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)、除去脂肪，經(jīng)過提取和凈化，以氫氧化鉀溶液為淋洗液，陰離子交換柱分離，電導(dǎo)檢測器檢測。以保留時間定性，外標法定量。
二、儀器和試劑
ICS-2000離子色譜儀（Dionex）， AS11-HC 陰離子色譜柱（Dionex），PURIST UV 超純水系統(tǒng)（RephiLe）。
RephiQuik Nylon 針頭濾器（RephiLe）。所有色譜試劑均為色譜純。
三、試驗方法
1、試樣預(yù)處理
將試樣裝入能夠容納 2 倍試樣體積的帶蓋容器中，通過反復(fù)搖晃和顛倒容器使樣品充分混勻直到使試樣均一化。
2、提取
稱取試樣 2.5 g（精確至0.01 g），置于100 ml 容量瓶中，加超純水 80 ml，搖勻，超聲30 min，加入 3 %乙酸溶液 2 ml，于 4 ℃ 放置 20 min，取出放置至室溫，加水稀釋至刻度。溶液經(jīng)濾紙過濾，取上清液備用。取上述備用的上清液約 15 ml，通過 0.22 μm 水性濾膜針頭濾器、C18 柱，棄去前面 3 ml（如果氯離子大于 100 mg/L，則需要依次通過針頭濾器、C18 柱、Ag 柱和 Na 柱，棄去前面 7 ml），收集后面洗脫液待測。
3、參考色譜條件
3.1 色譜柱：AS11-HC 陰離子色譜柱。
3.2 淋洗液：氫氧化鉀溶液，濃度為 5 mmol/L～50 mmol/L；洗脫梯度為5 mmol/L 33min， 50 mmol/L 5min，5 mmol/L 5 min；流速1.3 ml/min。
3.3 抑制器：ASRS 300。
3.4 檢測器：電導(dǎo)檢測器，檢測池溫度 30 ℃。
3.5 進樣體積：50 μL。
4、測定
4.1 標準曲線
取亞硝酸鹽標準液，加水稀釋，制成系列標準溶液，含亞硝酸根離子濃度為 0.00 mg/L、0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L、0.15 mg/L、0.20 mg/L 的標準溶液，從低到高濃度依次進樣。得到上述各濃度標準溶液的色譜圖。以亞硝酸根離子的濃度（mg/L）為橫坐標，以峰高（μS）或峰面積為縱坐標，繪制標準曲線或計算線性回歸方程。

4.2 樣品測定
分別吸取空白和試樣溶液 50 μL，在相同工作條件下，依次注入離子色譜儀中，記錄色譜圖。根據(jù)保留時間定性，分別測量空白和樣品的峰高（μS）或峰面積。
5、分析結(jié)果的表述
試樣中亞硝酸鹽（以 NO2- 計）含量按式（1）計算：

式中：
X ——試樣中亞硝酸根離子的含量，單位 mg/kg；
c——測定用試樣溶液中的亞硝酸根離子濃度，單位 mg/L；
c0——試劑空白液中亞硝酸根離子的濃度，單位 mg/L；
V——試樣溶液體積，單位 ml；
f——試樣溶液稀釋倍數(shù)；
m——試樣取樣量，單位 g。
說明：試樣中測得的亞硝酸根離子含量乘以換算系數(shù) 1.5，即得亞硝酸鹽（按亞硝酸鈉計）含量；
以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。
6、精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對值差不得超過算術(shù)平均值的 10 %。
本方法中亞硝酸鹽檢出限分別為 0.2 mg/kg。

在離子色譜檢測中，水中的各種污染物，顆粒雜質(zhì)，離子，有機物和細菌對儀器使用壽命及檢測結(jié)果有著非常大的影響。首先，顆粒物會堵塞泵和管路，導(dǎo)致設(shè)備或色譜柱的損壞；其次，水中離子雜質(zhì)會對正常分析產(chǎn)生很大程度的干擾，從而加大實驗者工作的難度；有機物的存在會降低色譜柱壽命并且干擾測定和分析；而細菌則會持續(xù)地釋放離子和小分子有機物，另一方面細菌也可視為顆粒物，對儀器造成破壞。

為達到滿意的實驗效果，確保分析的準確性，RephiLe 特別推薦各研究工作人員使用PURIST UV 超純水系統(tǒng)，該超純水儀是一款特別適合為儀器分析提供超純水的產(chǎn)品，精致小巧，使用簡便。PURIST UV 超純水儀采用超大容量的四管純化柱，同時采用內(nèi)部超純水定時循環(huán)系統(tǒng)，配合雙波長紫外燈可以有效去除水中的離子雜質(zhì)，控制超純水系統(tǒng)中的有機物及微生物含量。產(chǎn)水電阻率可達 18.2 MΩ•cm。終端采用 0.22 μm 的過濾器，可以有效去除顆粒和細菌。 同時，RephiLe還可為客戶提供一套全方位的純水，超純水使用解決方案 - Direct-Pure EDI + PURIST UV 組合型純水處理系統(tǒng)。該組合套裝可以同時提供二級純水及超純水，以滿足用戶在儀器分析中不同情況下的用水需求。Direct-Pure EDI 二級純水系統(tǒng)，使用西門子公司的EDI模塊，水質(zhì)穩(wěn)定可靠，其產(chǎn)水作為 PURIST UV 的進水，可最大限度發(fā)揮PURIST的功效，保證用戶在使用中用水無憂。另外，RephiLe 還可提供 Direct-Pure UP 超純水一體機，該純水儀以自來水為進水，同時制備反滲透 RO 水和高品質(zhì)的超純水，一機兩水，給客戶更多的選擇。