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大鼠痛覺模型的建立方法,Alzhermer病的動物模型,大鼠神經(jīng)功能缺損的詳細評分標準

瀏覽次數(shù):2515 發(fā)布日期:2013-11-4  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負

大鼠痛覺模型的建立分為下面幾個步驟:

1、領(lǐng)取SD雄性大鼠,體重200-220g為宜。

2、試驗前測試痛閾(作者采用儀器為意大利Ugobasile的heat-flux meter測痛儀),痛閾極端大/小的挑除不用。

3、試驗前至少3天每日上午9點-9點半將大鼠放入觀察籠中適應(yīng)環(huán)境。

4、試驗時用微量注射器抽取100-200ul甲醛(濃度可自己定)于大鼠下肢腳掌皮內(nèi)注射,注射后留置針頭約30-60秒。

5、試驗時,將大鼠放入觀察籠,攝像,人員必須全部離開。

6、以大鼠抬足和舔舐足掌為指標記錄相關(guān)數(shù)據(jù)。

注意事項:大鼠飼養(yǎng)時要勤換墊料(最好每天換)。如果有大鼠胃腸不好,要及時用慶大霉素給予治療,因為大鼠的健康狀態(tài)對其行為影響甚是明顯。為保證試驗結(jié)果的準確性,空調(diào)應(yīng)24h開放,保證室內(nèi)溫度22℃左右(環(huán)境溫度小于16℃大鼠的行為明顯改變。┎⑶掖_保每天能夠光照12h。 

 


SD大鼠200-250克。用3%戊巴比妥鈉(35-40mg/kg體重)腹腔麻醉動物后,固定在腦立體定位儀上(參照大鼠全腦立體定位圖譜),以前囟為零點,選出進刀坐標:前后坐標(AP)1.8mm,中線旁開(L)坐標1.0mm,腹側(cè)坐標(v)4. 0mm。首先用牙科鉆在上述坐標的鉆孔開骨窗,去除顱骨,挑開硬腦膜,用自制雙刃不銹鋼刀片(寬2mm,厚0.1mm)按上述坐標從腦冠狀面插入腦內(nèi)。然后,將刀向外移動1.5mm,再降刀1mm,并上下抽刀10余次,以完全切斷彎窿海馬傘。最后將刀片退至L1.0mm處,抽出刀片。

動物分組

1. 實驗組:10只,按上述方法切斷左側(cè)穹窿海馬傘;

2. 假手術(shù)組:10只,開顱并挑開硬膜膜,切斷皮質(zhì),但不切斷穹窿海馬傘,最后縫合頭皮;

3. 空白對照組:10只,做水迷宮行為學(xué)檢測和電生理檢驗。以Morris水迷宮行為學(xué)檢測。(提供兩種數(shù)據(jù))定位航行能力。


大鼠神經(jīng)功能缺損的詳細評分標準

1.神經(jīng)行為評分

在梗死后24 h,按照Masao Shmi izu-Sasamata的方法[3]對所有大鼠進行神經(jīng)行為評分,評分標準包括:①自主活動的程度,②左前肢偏癱,③提尾時左前肢伸不直,④抗側(cè)推能力,⑤向左傾斜度,⑥向左環(huán)行度,⑦對觸須的反應(yīng)。以上指標無異常為0,中等異常為1,嚴重異常為2,將各項評分相加,總分為0~14分。

2.動物行為學(xué)評定

①0:無神經(jīng)損傷癥狀;

②1:不能完全伸展對側(cè)前爪;

③2:向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈;

④3:向?qū)?cè)傾倒;

⑤4:不能自發(fā)行走,意識喪失。

3.大鼠神經(jīng)損傷嚴重缺損評分(Neurological Severity Scores,NSS):

0:神經(jīng)功能正常;

1:輕度神經(jīng)功能缺損(提尾時左前肢屈曲);

2:中度神經(jīng)功能缺損(行走時向左側(cè)轉(zhuǎn)圈);

3:中度神經(jīng)功能缺損(向左側(cè)傾斜);

4:無自發(fā)行走,意識減退;

5:與缺血有關(guān)的死亡。

4. 平衡木試驗(Beam Balance Test, BBT):

把大鼠置于一寬1.5cm的木條上。木條一端懸空,另一端固定于一塊40x40cm的平板中心,以防止大鼠從木條上爬到桌面上使實驗失敗。木條下備有軟墊以防大鼠掉下時跌傷。根據(jù)2分鐘內(nèi)大鼠的平衡能力行神經(jīng)學(xué)評分。正常大鼠的平衡能力在1-2分鐘。

平衡試驗評分標準:

1在木條上站穩(wěn),無搖晃,持續(xù)2分鐘

2在木條上站穩(wěn),左右搖晃,未滑下,持續(xù)2分鐘

3在木條上站立,下滑至一側(cè),未掉下,持續(xù)2分鐘

4在木條上站立不到2分鐘即從木條上掉下

5試圖在木條上站穩(wěn)、但在數(shù)秒鐘即掉下

6無任何站立能力

5. 抬高身體搖擺試驗(Elevated Body Swing Test, EBST):

用于測量運動不對稱,EBST測量時首先用手提起大鼠的尾根部,大鼠頭部懸垂距平面5cm左右,這時大鼠頭部會向左側(cè)或右側(cè)旋轉(zhuǎn),向單測旋轉(zhuǎn)的角度大于100時為計數(shù)的標準,記錄旋轉(zhuǎn)的方向和角度,一次試驗后讓大鼠休息1min,再進行下一次實驗,重復(fù)試驗20次,記錄總的次數(shù)和方向。

6. 一次性被動回避平臺試驗(Step-down Passive Avoidance Test, SDPAT)是一種用于研究記憶的簡單行為模型,主要適用于研究記憶的鞏固( memory consolidation)和記憶的保持(memory retention)。該模型含有一定的空間記憶成份,試驗箱是一個長方形的封閉空間,高為60cm,箱內(nèi)有一較小的平臺9 cm X 9 cm, 高出底面約2 cm,動物只能不十分舒服地堅持在平臺上,如跑下平臺(銅棒,通電,30 V)即遭到電擊。訓(xùn)練過程是這樣的:首先把動物放在平臺上,大鼠一般在平臺上只能停留幾分鐘,就會跑下來,但由于底面的金屬條是通電的,大鼠在尋找一段時間后,能夠找回平臺。這時第一次試驗結(jié)束,24 h后,再次把大鼠放在平臺上,這時底面的金屬條并不通電,記錄大鼠在平臺上滯留的時間,根據(jù)測試間隔時間的長短和在平臺上滯留時間的多少來判定大鼠對上次電擊的記憶保持能力。

7. (Water Maze Test, WMT)

用于測量大鼠空間學(xué)習(xí)能力。每組于移植后的第7周進行。在相同室溫(25±20C和象限條件下,將3組動物連續(xù)訓(xùn)練4d,/d,每次限定時間為120s,超過120s 仍找不到平臺者記為未找到平臺,次間隔為10min,第5天測試。

 

來源:北京眾實迪創(chuàng)科技發(fā)展有限責(zé)任公司
聯(lián)系電話:400-016-4066(免費電話);010-85376599
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