復(fù)方酸棗仁油梔子油對小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響

【摘要】  目的觀察酸棗仁油、梔子油組成的復(fù)方酸棗仁油梔子油促進學(xué)習(xí)記憶作用和二藥的相互作用。方法采用避暗、跳臺、水迷宮實驗，分別利用東莨菪堿、環(huán)己酰亞胺、亞硝酸鈉、4.282mol/L乙醇造成小鼠的記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)障礙，觀察復(fù)方酸棗仁油梔子油對正常及記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶作用。結(jié)果對正常和記憶損傷小鼠，復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油能縮短訓(xùn)練時入室潛伏期、減少入室錯誤次數(shù);能延長訓(xùn)練后入室潛伏期、減少入室錯誤次數(shù)，減少跳臺錯誤次數(shù);也能縮短水迷宮實驗小鼠的登臺潛伏期，增加其穿越次數(shù)，復(fù)方中劑量縮短小鼠登臺潛伏期較酸棗仁油、梔子油作用強。結(jié)論復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油具有促進學(xué)習(xí)記憶作用;復(fù)方中酸棗仁油、梔子油起協(xié)同作用。

   【關(guān)鍵詞】  復(fù)方酸棗仁油梔子油;酸棗仁油;梔子油;學(xué)習(xí)記憶

ABSTRACT: ObjectiveTo observe the effects of compound jujube seed oil and gardenia oil in improving learning and memory in mice as well as the interaction between jujube seed oil and gardenia oil.MethodsScopolamine, cycloheximide, sodium nitrite and ethanol were utilized to study the acquisition, consolidation and retrieval processes of memory in mice by the step-through test, step-down test and Morris water maze test, and to observe the effects of jujube seed oil and gardenia oil compound on learning and memory in mice.ResultsIn normal mice and memory-damaged mice, the jujube seed oil, gardenia oil and their compound all could shorten delitescence of training, reduce error number times of training errors, extend delitescence of post-training by the step-through test, reduce error number of post-training by the step-through and step-down tests, shorten the delitescence of upper platform and increase passing-through number by Morris water maze test. The compound shortened the delitescence of upper platform better than either of the two oils.ConclusionThe compound jujube seed oil and gardenia oil can promote learning and memory in mice, and the two oils in combination show an obvious synergistic effect.

  KEY WORDS: compound jujube seed oil and gardenia oil; jujube seed oil; gardenia oil; learning and memory

  學(xué)習(xí)記憶是大腦最基本也是最重要的高級神經(jīng)功能，既是認(rèn)知活動的組成部分，也是重要的智力因素。學(xué)習(xí)主要是指人或動物通過神經(jīng)系統(tǒng)接受外界環(huán)境信息而影響自身行為的過程;記憶是指獲得的信息或經(jīng)驗在腦內(nèi)貯存和提取(再現(xiàn))的神經(jīng)活動過程[1]。酸棗仁為鼠李科(Rhamnaceae)植物酸棗[Ziziphus jujuba Mill. var. Spinosa (Bunge)Hu ex H.F.Chow]的干燥成熟種子。甘酸性平，善養(yǎng)肝血，益心陰而寧心安神。梔子為茜草科植物梔子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果實。梔子苦寒，清熱瀉火，涼血解毒，擅入心經(jīng)，長于清心透邪，除煩解郁而安神定志。二藥合用，為治血虛陰虧、熱擾神明而致心煩失眠之常用藥對。對復(fù)方酸棗仁油梔子油的鎮(zhèn)靜催眠抗驚厥作用已有報道。本文主要觀察其促學(xué)習(xí)記憶作用。

  實驗分4批進行，每批隨機分為復(fù)方大(5.4g/kg)、中(2.7g/kg)、小(1.35g/kg)劑量組，酸棗仁油組1.8g/kg，梔子油組0.9g/kg，均用生理鹽水稀釋至6mL/kg灌胃給藥，模型組、正常組給予等容積生理鹽水，每組10只。各組小鼠每天上午9∶00給藥1次，連續(xù)給藥15d。第16天上午給藥1h后開始避暗、跳臺和水迷宮訓(xùn)練并測定。

 2.1    復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶獲得障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響第16天上午給藥1h后，除正常對照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均依次腹腔注射

5mg/kg東莨菪堿溶液造成記憶獲得障礙模型。10min后，開始訓(xùn)練并測定各組小鼠的入室潛伏期和5min內(nèi)錯誤次數(shù)。15min后，測定5min內(nèi)小鼠跳下安全臺的錯誤次數(shù)。24h后，在與訓(xùn)練日相同的時段再次測試，記錄各組小鼠的入室潛伏期和5min內(nèi)入室錯誤次數(shù)以及小鼠第一次跳下安全臺的潛伏期和3min內(nèi)錯跳次數(shù)(表1、表2)。表1復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶獲得障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(避暗法)的影響  表2復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶獲得障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(跳臺法)的影響結(jié)果表明：對于記憶獲得障礙模型小鼠，復(fù)方酸棗仁油梔子油能明顯縮短訓(xùn)練時小鼠入暗室的潛伏期，并減少入室錯誤次數(shù);也能明顯延長訓(xùn)練后小鼠入暗室的潛伏期并減少入室錯誤次數(shù);減少訓(xùn)練后跳臺錯誤次數(shù)。酸棗仁油、梔子油也可減少訓(xùn)練時、訓(xùn)練后小鼠的入室錯誤次數(shù);延長訓(xùn)練后入室潛伏期，減少跳臺錯誤次數(shù)。說明復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油對記憶獲得障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶有促進作用。

    2.2   復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶鞏固障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響第16天上午給藥1h后，于訓(xùn)練后除正常對照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均立即腹腔注射120mg/kg環(huán)己酰亞胺溶液造成記憶鞏固障礙模型。24h后，在與訓(xùn)練日相同的時段再次測試，記錄各組小鼠的入室潛伏期和5min內(nèi)電擊次數(shù)以及小鼠第一次跳下安全臺的潛伏期和3min內(nèi)錯誤次數(shù)。結(jié)果顯示：復(fù)方酸棗仁油梔子油能明顯減少訓(xùn)練時正常小鼠的入室錯誤次數(shù);能延長訓(xùn)練后記憶鞏固障礙模型小鼠的入室潛伏期，明顯減少入室錯誤次數(shù);減少訓(xùn)練后跳臺錯誤次數(shù)。酸棗仁油、梔子油對訓(xùn)練時、訓(xùn)練后的正常和記憶障礙小鼠均可減少其入室錯誤次數(shù)。說明復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油能改善正常和記憶鞏固障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力(表3、表4)。表3復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶鞏固障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(避暗法)的影響表4復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶鞏固障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(跳臺法)的影響

     2.3   復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶的影響第16天上午給藥1h后開始訓(xùn)練并測定。24h后，在與訓(xùn)練日相同的時段，除正常對照組灌胃給予生理鹽水外，其余各組均灌胃給予4.282mol/L乙醇溶液10mL/kg造成記憶再現(xiàn)障礙模型。30min后，再次測試并記錄各組小鼠的入室潛伏期和5min內(nèi)電擊次數(shù)以及小鼠第一次跳下安全臺的潛伏期和3min內(nèi)錯誤次數(shù)(表5、表6)。表5復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(避暗法)的影響表6復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(跳臺法)的影響結(jié)果顯示：復(fù)方酸棗仁油梔子油能縮短訓(xùn)練時正常小鼠的入室潛伏期，減少入室錯誤次數(shù)，并能減少訓(xùn)練時跳臺錯誤次數(shù);能夠明顯延長訓(xùn)練后記憶再現(xiàn)障礙模型小鼠入室潛伏期及減少入室錯誤次數(shù);減少訓(xùn)練后跳臺錯誤次數(shù)。酸棗仁油、梔子油也可減少訓(xùn)練時正常小鼠的入室潛伏期及入室錯誤次數(shù);減少訓(xùn)練后記憶障礙小鼠跳臺錯誤次數(shù)。說明復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油能改善正常和記憶再現(xiàn)障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力。

       2.4    復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(水迷宮法)的影響

  第16天給藥1h后開始Morris水迷宮訓(xùn)練。將水池等分為4個象限，分別稱為SW、NW、SE及NE象限,在SW象限正中離池壁33cm處放一個直徑10cm、高15cm的平臺，平臺頂?shù)陀谒��?cm。迷宮上方安置帶有顯示系統(tǒng)的攝像機,同步記錄小鼠的運動軌跡。每只動物每天訓(xùn)練4次，訓(xùn)練期間迷宮外參照物保持不變。每天將小鼠從不同入水點背對站臺放入水池,并記錄小鼠自入水到找到站臺所需的時間，稱為潛伏期。用于測量小鼠空間學(xué)習(xí)和記憶的能力。找到后在平臺上保持15s，如1min內(nèi)找不到，引導(dǎo)到平臺上，保持15s。連續(xù)訓(xùn)練4d，最后1d訓(xùn)練后除正常對照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均立即皮下注射亞硝酸鈉120mg/kg，第20天給藥1h后進行行為測試。實驗開始將站臺的位置轉(zhuǎn)移到另一個象限中進行站臺遷移試驗。記錄潛伏期，然后把站臺去掉，記錄2min內(nèi)小鼠穿越站臺位點的次數(shù)，記為穿越次數(shù)。用于測量小鼠學(xué)會尋找平臺后，對平臺位置的記憶能力。實驗發(fā)現(xiàn)復(fù)方酸棗仁油梔子油于訓(xùn)練第2天(給藥第17天)即可縮短正常小鼠的潛伏期，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加縮短作用更加明顯;而酸棗仁油于訓(xùn)練第3天(給藥第18天)方可縮短正常小鼠的潛伏期，隨著訓(xùn)練天數(shù)的增加縮短作用越加明顯;用亞硝酸鈉制備記憶鞏固障礙后，仍可發(fā)現(xiàn)復(fù)方酸棗仁油梔子油縮短記憶障礙小鼠的潛伏期，增加其穿越次數(shù);酸棗仁油、梔子油也可縮短記憶障礙小鼠的登臺潛伏期;組方中以復(fù)方中劑量作用為佳，于給藥第19、20天復(fù)方中劑量縮短小鼠潛伏期較酸棗仁油、梔子油有顯著性意義，即ABA，ABB。說明復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油有促進正常及記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力;復(fù)方中酸棗仁油與梔子油在學(xué)習(xí)記憶方面有協(xié)同作用(表7)。表7復(fù)方酸棗仁油梔子油對記憶障礙模型小鼠學(xué)習(xí)記憶(水迷宮法)的影響

  采用避暗、跳臺、Morris水迷宮實驗法，給予東莨菪堿、環(huán)己米特(環(huán)己酰亞胺)、亞硝酸鈉、乙醇等公認(rèn)的記憶障礙工具藥，分別造成小鼠獲得、鞏固和再現(xiàn)性記憶缺損模型，發(fā)現(xiàn)復(fù)方酸棗仁油梔子油能減少正常小鼠入室錯誤次數(shù)。對記憶獲得、鞏固、再現(xiàn)障礙模型小鼠訓(xùn)練時的入暗室潛伏期都有縮短作用，減少入室錯誤次數(shù)及錯誤跳臺次數(shù);對訓(xùn)練后的入暗室潛伏期有延長作用，也可減少訓(xùn)練后的入室錯誤次數(shù)及錯誤跳臺次數(shù)。酸棗仁油、梔子油也可減少訓(xùn)練時、訓(xùn)練后記憶障礙模型小鼠的入室錯誤次數(shù);延長訓(xùn)練后入室潛伏期，減少跳臺錯誤次數(shù)。復(fù)方酸棗仁油梔子油、酸棗仁油、梔子油還可縮短水迷宮實驗正常及記憶損傷小鼠的潛伏期，增加其穿越次數(shù)。因此，復(fù)方酸棗仁油梔子油對正常和記憶缺損小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能均有改善和提高作用;酸棗仁油、梔子油對記憶缺損小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能也有改善和提高作用;酸棗仁油與梔子油在學(xué)習(xí)記憶方面有相加或協(xié)同作用，表明該復(fù)方配伍合理。

  以上作用可能與酸棗仁油、梔子油含有多種植物脂肪酸有關(guān)。超臨界CO2萃取的酸棗仁油、梔子油的組成較為單純，主要含油酸、亞油酸[8-10]。亞油酸在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成亞麻酸、花生四烯酸等。油酸可在體內(nèi)�；�生成油酰胺，已知油酰胺具有影響學(xué)習(xí)記憶的作用[11]。

  花生四烯酸是人體中含量最高、分布最廣的一種多不飽和脂肪酸。在維持膜的物理特性和功能方面起著非常重要的作用�；ㄉ�四烯酸還參與神經(jīng)內(nèi)分泌，調(diào)節(jié)多種激素和神經(jīng)肽如加壓素的分泌�，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)花生四烯酸的代謝產(chǎn)物——加壓素可提高長時學(xué)習(xí)記憶功能[12-13]。 酸棗仁油、梔子油組成的復(fù)方產(chǎn)生促學(xué)習(xí)記憶作用，對于該復(fù)方的作用機制，目前尚不清楚，有待進一步研究。

  近年來，隨著人們對植物脂肪酸越來越多地關(guān)注，對植物脂肪酸有效成分的提取、在生物體內(nèi)的轉(zhuǎn)化、生物學(xué)效應(yīng)、作用靶點以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等縱深方面的研究，為植物脂肪酸的綜合開發(fā)和利用，提供了非常廣闊的應(yīng)用前景。