如何選擇蛋白印跡實驗中的印跡膜

硝酸纖維素膜（NC膜）是蛋白和核酸雜交最常用的印跡膜，是蛋白印跡實驗的標(biāo)準(zhǔn)固相支持物。在低離子轉(zhuǎn)移緩沖液的環(huán)境下，大多數(shù)帶負(fù)電荷的蛋白質(zhì)會與硝酸纖維素膜發(fā)生疏水作用而高親和力的結(jié)合在一起，雖然這其中的機制還不是十分清楚，但由于硝酸纖維素膜的這個特性，而且易于封閉非特異性結(jié)合，從而得到了廣泛的應(yīng)用。目前市場上的NC膜產(chǎn)品數(shù)量眾多，品質(zhì)參差不齊。

從膜的質(zhì)地上來看，最重要的指標(biāo)就是單位面積上能夠結(jié)合的蛋白的量。硝酸纖維素膜的結(jié)合能力主要與膜的硝酸纖維素的純度有關(guān)，市場上有些硝酸纖維素膜通常會還有大量的醋酸纖維素，因而降低了蛋白的結(jié)合量。如果采用的是100%純度的硝酸纖維素，保證了最大的蛋白結(jié)合量，可達80-150μg/cm2。Sartorius的NC膜是致密的 100% 硝酸纖維素濾膜，是用于Western、Northern和Southern雜交的優(yōu)良濾膜。由于100%的純度，因而也大大減少了非特異性的結(jié)合，降低雜交背景，保證最大的蛋白結(jié)合量，可達150-200μg /cm2。除此之外，Sartorius的NC膜質(zhì)的精良，具有良好的韌性與強度。相比傳統(tǒng)的NC膜質(zhì)地比較脆，漂洗一兩次就會破損，Sartorius的NC膜的優(yōu)勢就凸顯了出來，既能反復(fù)使用，又不易破損，是Western、Northern和Southern雜交實驗的最佳選擇。

從膜的選擇上來看，根據(jù)被轉(zhuǎn)移的蛋白分子量大小，要選擇不同孔徑的硝酸纖維素膜。因為隨著膜孔徑的不斷減小，膜對低分子量蛋白的結(jié)合就越牢固。但是膜孔徑如果小于0.1mm，蛋白的轉(zhuǎn)移就很難進行了。因此，我們通常用0.45μm和0.2μm兩種規(guī)格的硝酸纖維素膜。大于20kD的蛋白就可以用0.45μm的膜，小于20kD的蛋白就要用0.2μm的膜了，如果用0.45μm的膜就會發(fā)生“Blowthrough”的現(xiàn)象。Sartorius的NC膜也有兩種可供選擇，幾乎能夠涵蓋大多數(shù)用戶的需求。孔徑為 0.2 µm 的硝酸纖維素膜推薦用于轉(zhuǎn)印小分子蛋白和核酸，能避免由于膜轉(zhuǎn)移而導(dǎo)致的樣品損失；孔徑為 0.45 µm 的硝酸纖維素膜推薦用于轉(zhuǎn)印大分子蛋白和核酸以及大多數(shù)分析型印跡，包括蛋白ssDNA 和 RNA 轉(zhuǎn)印。

從膜的使用上來看，市場上的NC膜有需要預(yù)處理才能使用的，也有不需要預(yù)處理可直接使用的。Sartorius的NC膜不需要經(jīng)過無水甲醇預(yù)處理，膜僅需要在水中簡單潤濕，而后放入轉(zhuǎn)移緩沖液中。簡單操作就可以放心使用。

因此, Sartorius的NC膜是相關(guān)雜交科研實驗的理想選擇。

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