ECL Plus 超敏發(fā)光液使用說明書

ECL Plus 超敏發(fā)光液使用說明書
貨號：PE0010
規(guī)格：25ml/100ml
保存：4℃密封避光保存有效期一年以上。25℃室溫放置數(shù)月不影響質(zhì)量。
產(chǎn)品簡介：
ECL Plus 超敏發(fā)光液直接或間接檢測與辣根過氧化物酶HRP關(guān)聯(lián)的蛋白或核酸底物。這一獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑，具有極高靈敏度和高信噪比，可檢測出10-100 fg的微量抗原；發(fā)光迅速，熒光可使X感光膠片感光達(dá)12小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測。同時該試劑允許使用更高的抗體稀釋倍數(shù)，（1：2000-1：10000），極其節(jié)省抗體。 用途：用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。 安全性：無特殊毒性，按普通化學(xué)品處理。

使用方法：

1、常規(guī)電泳、轉(zhuǎn)膜、HRP標(biāo)記抗體或核酸探針孵育、洗膜。注意用HRP標(biāo)記IgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾心法。核酸雜交膜用HRP標(biāo)記探針雜交，洗膜。

2、在洗滌膜上的HRP標(biāo)記二抗的同時，新鮮配制發(fā)光工作液:分別取等體積的溶液A和B混合，放置使之升到室溫否則會減弱熒光強(qiáng)度。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有減低。

3、用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入并與發(fā)光工作液（0.125ml發(fā)光工作液/cm2膜）充分接觸。室溫孵育3分鐘后立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利于反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均勻和靈敏度明顯降低。為達(dá)節(jié)約目的可將膜減小但勿降低發(fā)光液用量。

4、用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。

5、在X光膠片暗盒內(nèi)面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將雜交膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹雜交膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋雜交膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，最好蛋白帶面向上。

6、在黑暗中放入X感光膠片，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。

注意事項(xiàng)：

1、步驟1-5可在日光燈下操作；但發(fā)光液暴露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印，保持膜的潔凈。

2、長時間曝光或蛋白質(zhì)過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。

3、發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱，肉眼雖不可見但能使X膠片曝光。不能單憑肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時并使X膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。

4、由于超敏發(fā)光液的高靈敏度，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1：1000-1：4000，二抗1：2000-1：5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失��！

5、某些市售保鮮膜包裹印跡膜時會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜，例如“克林萊”牌保鮮膜。 6、使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光-放射自顯影曝光標(biāo)簽可幫助確定膠片上條帶的準(zhǔn)確位置和大小。 7、NaN3能抑制HRP活性，回收二抗時應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。

相關(guān)產(chǎn)品：
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1010 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇）
P1300 SDS-PAGE凝膠制備試劑盒
PR1700 預(yù)染次高分子量蛋白MARKER
T1070 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液
D1060 10×電泳轉(zhuǎn)移緩沖液
SW3010 膜封閉液
SW3020 膜再生液