ACQUITY UPLC M-Class用于微升級二維反相/反相肽段分離

 Matthew A. Lauber、 Stephan M. Koza 和 Kenneth J. Fountain

目的
證明ACQUITY UPLC®M-Class系統(tǒng)和配套的色譜柱進行微升級2D-RP/ RP肽段色譜的性能和重現(xiàn)性。

背景信息
微升級LC-MS方法在蛋白質(zhì)組學領域得到了日益廣泛的應用。近來此方法作為Elisa免疫分析的互補技術，在分析生物藥品中殘留宿主細胞蛋白質(zhì)（HCP）上也得到了關注和應用。采用如300 µm窄內(nèi)徑色譜柱能夠從相對少量的樣品中獲得豐富的信息。同時，在此類工作中需要進行高峰容量的肽段分離，因為更高的分離效率才能更容易檢出待測物。

通過多維色譜可以提高肽段分析的峰容量，二維正交的色譜分離方法相結(jié)合可提供更好的分離能力。反相/反相（2D-RP/ RP）二維色譜具有特殊的優(yōu)勢，通過使用具有卓越的化學穩(wěn)定性和機械穩(wěn)定性的亞乙基橋雜化硅膠顆粒固定相（BEH Technology™），第一維進行高pH反相分離，隨后經(jīng)過在線富集后得肽段混合物在亞2 µm顆粒的分析柱進行第二維低pH反相梯度分離（具體操作請參考以前的應用資料）。

使用配置2D-RP/RP功能的ACQUITY M-Class系統(tǒng)和配套的色譜柱進行復雜肽段分析，峰容量更高，重現(xiàn)性更好。

在本簡報中，我們通過使用ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)和ACQUITY UPLC M-Class 300 μm內(nèi)徑的分析柱，進一步拓展了此技術的應用和性能。通過測試不同色譜柱組和使用壽命可以看到，此系統(tǒng)不僅具有卓越的分離能力，還實現(xiàn)了絕佳的重現(xiàn)性和可靠性。使用ACQUITY UPLC M-Class系統(tǒng)和色譜柱的2D RP/RP在線二維色譜分離將是一種進行復雜樣品研究肽段混合物如殘留宿主細胞蛋白的理想方法，峰容量高，性能穩(wěn)定可靠。

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