標(biāo)記羊抗兔IgG保存策略

       辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記羊抗兔IgG應(yīng)用：WB（1:1000 - 1:50000）、ELISA（1:500 - 1:10000） IHC（1:50 - 1:500）。 由于具體實(shí)驗(yàn)中檢測方法的靈敏度，溫度及孵育時(shí)間等因素均可影響抗體最適工作濃度，所以實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行特定實(shí)驗(yàn)時(shí)，需根據(jù)具體情況優(yōu)化最適使用濃度。 反應(yīng)性：該山羊抗兔二抗與兔IgG分子有特異性反應(yīng)，與其它兔免疫球蛋白（包括IgM、IgE、IgD、IgA等）的輕鏈有交叉反應(yīng)。該二抗與血清內(nèi)非免疫球蛋白無交叉反應(yīng)，但可能與其它種屬的免疫球蛋白有交叉反應(yīng)。

    辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記羊抗兔IgG hrp過量導(dǎo)致wb實(shí)驗(yàn)過程中的ecl猝滅現(xiàn)象的原理：淬滅是由于顯色反應(yīng)中的hrp酶量過多造成的，推薦的改進(jìn)方法是，減少hrp的量，包括，減少蛋白的上樣量，降低一抗?jié)舛�，降低二抗�(jié)舛冗@三個(gè)方法，總之就是減少hrp在膜上的結(jié)合量。可能有的人會(huì)問，我大量的抗體或者蛋白上樣量都做不出來，減少反而能做出來，這怎么可能呢？呵呵，其實(shí)我們首先要弄清楚，在顯色反應(yīng)中誰是過量的問題，當(dāng)然是底物，因?yàn)椋�亮度與hrp的量相關(guān)，hrp與目的蛋白的量相關(guān)，只有底物過量hrp的量才能清楚的反應(yīng)目的蛋白的量（這里就不考慮定性實(shí)驗(yàn)了）。因此，hrp相對(duì)于底物必須是不足量的。其次，應(yīng)該有很多朋友都遇到過這樣一個(gè)現(xiàn)象：就是曝光時(shí)，條帶特別亮，可是壓上一兩次片子，條帶就滅了，但是如果把這張膜再用TBST洗過夜，再去曝光，熒光反而能持續(xù)更長的時(shí)間，這就是由于洗滌，使原先一些結(jié)合不牢的二抗掉了下來，曝光時(shí)，hrp的量降低了，不會(huì)較快的消耗底物，所以，發(fā)光的時(shí)間就變長了。

    最后對(duì)標(biāo)記羊抗兔IgG該如何保存呢？專家建議：保存在-20°C.保質(zhì)期為收到貨物后至少1年，合適的保存方式可以延長保質(zhì)期。推薦閱讀》》TRITC標(biāo)記二抗供應(yīng) http:///cpdg/2014/0417/701.html