使用Ostro樣品制備板結(jié)合LC-MS/MS對牛奶中的獸藥多殘留進行篩查
簡介
Ostro樣品制備板可對生物樣品中的堿性藥物和相關(guān)化合物進行簡單、快速的LC-MS測定。Ostro樣品板為液液萃取、蛋白質(zhì)沉淀、過濾以及后續(xù)從最終萃取物中清除磷脂提供了方便。本文運用Ostro樣品板對牛奶中的獸藥多殘留進行了篩查。使用此樣品板只需簡單的幾個步驟即可有效沉淀蛋白質(zhì)并除去潛在的干擾物質(zhì)，從而完成牛奶樣品的制備。萃取的樣品通過樣品板時，蛋白質(zhì)通過過濾被去除，而磷脂干擾物則通過被保留在專利的吸附劑上被去除。完成簡單的樣品制備步驟之后，使用UPLC-MS/MS對復溶樣品進行分析。為了證明本方法的適用性，我們從主要的獸藥種類中選擇了具有代表性的化合物，包括四環(huán)素、氟喹諾酮、磺胺類、大環(huán)內(nèi)酯、β-內(nèi)酰胺和β-腎上腺素能藥物。
樣品制備
將125 μL牛奶轉(zhuǎn)移至樣品板孔中（樣品體積不得大于125 μL）。加入375 μL 0.2%甲酸的乙腈（ACN）溶液。抽吸幾次以使其充分混合。洗脫至收集板中。加入100 μ L 200 mM甲酸銨的甲醇/ACN（50:50）溶液，充分混合。蒸干并復溶于100 μL ACN/25 mM甲酸銨水溶液（25:75）中。圖1展示了使用Ostro樣品板時的SPE典型設置。
結(jié)果與討論
多殘留分析
Ostro樣品板的結(jié)果與之前發(fā)表的方法1相當。然而，Ostro樣品板操作耗時更少，并且更適用于高通量分析。使用此方法，一般分析人員可在幾分鐘內(nèi)制備10個甚至更多的樣品，而采用之前的方法則需幾個小時。圖2顯示了恩諾沙星（10 μg/ L）基質(zhì)匹配標準品的典型LC-MS色譜圖。盡管對于大部分其它化合物來說，使用該方法分析時表現(xiàn)出相似的分析性能，但仍然無法對10 μg/ L濃度的金霉素、土霉素和林可霉素進行定量分析。最近研發(fā)了一種四環(huán)素的替代方法2。表2示出了觀察到的多殘留牛奶分析的回收率數(shù)據(jù)。
磷脂去除
牛奶中含有大量的磷脂，約占其總脂肪含量的1% 3。在LC分離中，這些磷脂會直接干擾后洗脫的化合物。此外，結(jié)果表明磷脂殘留的累積會使反相LC分離的性能變差4。圖3展示了采用為鑒定磷脂而選擇的MRM通道（m/z184>184）對牛奶樣品進行分析的UPLC-MS/MS色譜圖。下圖展示了使用Ostro樣品板處理牛奶樣品獲得的結(jié)果。上圖為采用蛋白質(zhì)沉淀（未經(jīng)SPE純化）獲得的結(jié)果。Ostro樣品板可有效去除超過98%的磷脂。
結(jié)論
■ 展示了使用Ostro樣品制備板從牛奶中快速萃取多種獸藥。
■ 除四環(huán)素外，該方法對其它所有種類的被測化合物均表現(xiàn)出良好的篩查分析性能。
■ 使用Ostro直通式樣品制備板可有效去除牛奶萃取物中的幾乎全部磷脂。
參考文獻
1. Optimized Extraction and Cleanup Protocols for LC-MS/MS Multi-Residue Determination of Veterinary Drugs in Edible Muscle Tissues, Waters Application Note 720004144en
2. HPLC/UV Determination of Tetracyclines in Milk Using Mixed-Mode SPE and eXtended
Performance [XP] 2.5 μm Columns, Waters Application Note 720004582en
3. Contarini, G and Povolo, M., Phospholipids in Milk Fat: Composition, Biological and Technological Significance, and Analytical Strategies, Int. J. Mol. Sci, 14(2), 2808–2831(2013)
4. Eliminating Phospholipids in Drug Discovery Extractions Using a Fast, Generic Sample Clean-up Method, Waters Application Note 720004046en
