BSA、封閉血清與Fab單鏈二抗在封閉實(shí)驗(yàn)中的應(yīng)用

免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中，嘗嘗會出現(xiàn)高背景值，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的檢測。這是因?yàn)樵谑褂孟嚓P(guān)免疫學(xué)試劑時，蛋白與未吸附的固體載相結(jié)合，發(fā)生非特異性結(jié)合造成的。免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中常通過封閉試劑來封閉這樣的固相載體部位，以減少或消除非特異性結(jié)合背景的影響。

常見的封閉劑包括脫脂奶粉、牛血清白蛋白BSA、動物血清和Fab片段單鏈二抗。因?yàn)槟谭壑锌赡艽嬖谔烊坏纳�物素、堿性磷酸酶，不適合用于磷酸化蛋白檢測的封閉以及使用生物素和堿性磷酸酶系統(tǒng)的檢測實(shí)驗(yàn)。另外，脫脂奶粉中可能含有牛IgG，能夠與抗牛、山羊、綿羊、馬等二抗有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，會造成一定的背景。相較于其他封閉劑，脫脂牛奶作為封閉劑的應(yīng)用范圍較窄。艾美捷為您提供全面的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)封閉劑。

免疫學(xué)試驗(yàn)中常通過封閉試劑來封閉未吸附蛋白的固相載體部位，以減少非特異性結(jié)合背景的影響。比如ELISA 試驗(yàn)中繼包被之后用0.05-0.5% BSA 等溶液來占據(jù)未能被包被的空隙；又如WB 試驗(yàn)中常用5% 脫脂奶粉或者BSA 封閉膜上除轉(zhuǎn)印蛋白占據(jù)的其它部位。除了用于封閉未吸附蛋白的固相載體，封閉試劑也被廣泛用于封閉其它非特異性結(jié)合。如ELISA 實(shí)驗(yàn)中，特異性抗體與血清樣本中IgM、IgG 型類風(fēng)濕因子以及補(bǔ)體等組分產(chǎn)生非特異性結(jié)合；IHC、IF 等試驗(yàn)中，特異性抗體與樣本中Fc 受體的結(jié)合，以及在IHC 和IF 雙染或三染實(shí)驗(yàn)中，驢血清也被廣泛用于封閉試劑以減少抗體之間的非特異性結(jié)合；另外，F(xiàn)ab 片段單鏈二抗也被用于熒光雙染中的有效封閉。

牛血清白蛋白BSA

BSA是最為常見的封閉試劑，與脫脂奶粉相比，BSA組分相對單一，適用于ELISA實(shí)驗(yàn)，生物素、堿性磷酸酶系統(tǒng)的免疫學(xué)檢測實(shí)驗(yàn)或者其他對特異性要求較高的實(shí)驗(yàn)。值得注意的是，普通級別的BSA中也可能存在牛IgG，因此與能夠與抗牛、山羊、綿羊、馬等二抗有較強(qiáng)的交叉反應(yīng)，會造成一定的背景，建議使用不含IgG的BSA產(chǎn)品。

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動物血清serum

封閉用血清來源選擇應(yīng)與二抗為相同種屬來源作為封閉劑。封閉血清的主要原理：1.待檢樣本會非特異性的和蛋白結(jié)合，從而導(dǎo)致背景過高。這點(diǎn)與BSA原理相同。2.待檢樣本中可能會有Fc受體，可以和抗體恒定區(qū)結(jié)合，而因?yàn)榉忾]血清中含有抗體，因此用血清可以封閉一抗及二抗和樣本Fc受體之間結(jié)合。這是BSA無法滿足的。需要注意的是，某些封閉血清內(nèi)可能會含有疊氮化鈉，因此不適用于HRP酶標(biāo)的免疫學(xué)檢測體系。

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Fab片段單鏈二抗

由于二價的抗體（全I(xiàn)gG或F（ab’）2片段）有兩個結(jié)合位點(diǎn)，不能用來封閉。而Fab片段單鏈二抗只有一個結(jié)合位點(diǎn)，因此可完全封閉免疫球蛋白。例如，在兩個單抗的雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，可用于封閉樣本表面的免疫球蛋白，也可用于封閉組織切片或細(xì)胞表面的內(nèi)源性免疫球蛋白。Fab片段二抗非常適合封閉IgG、IgM等免疫球蛋白。一般用于血清封閉后使用10-20ug/ml濃度的Fab抗體，可有效封閉內(nèi)源性IgG蛋白。此外，巧妙地使用Fab片段單價二抗可解決IF雙標(biāo)實(shí)驗(yàn)中，兩個一抗來自同一種屬的麻煩。

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