光學顯微鏡對玻片厚度的要求

麥克奧迪顯微鏡脫水與樣品附著：由于多次離心使細胞丟失，光學顯微鏡因此最好先將細胞附著在玻片或塑料片表面，使細胞隨同該玻片或塑料片一起脫水、干燥。光學顯微鏡對玻片厚度的要求為使細胞能附著在玻片或塑料片，需先在玻片或塑料片上鋪設(shè)一層膜，鋪膜方法如下:

(1)光學顯微鏡最簡單的方法是鋪一層薄的聚乙烯醉縮甲醛(formvar )膜。將洗凈的玻片在(0.5-1)%聚乙烯醉縮甲醛氯仿溶液中浸葵，待氛仿?lián)]發(fā)后玻片上呈現(xiàn)一層白膜，將玻片在抓仿中振蕩幾次使膜變薄即可用。

(2)將0.1緯多聚L-賴氨酸(制備時將1mg多聚賴氨酸溶于l ml過濾后的水中)滴在洗凈的玻片上，待液滴展開后在450C供箱中干燥。此種方法最好，因為多聚L-賴氨酸帶正電荷，能使較多的表面帶負電荷的細胞附著。

(3)麥克奧迪顯微鏡將血漿和甘油各以(30--40)%，光學顯微鏡對玻片厚度的要求和((3-5)%的比例加到蒸餾水中，成為甘油蛋白液。將該液滴在洗凈的玻片上，光學顯微鏡展開并烘干。將鋪好的蛋白膜浸入2%戊二醛中使蛋白固定，洗凈后干燥可備用。使用前將血漿滴在該蛋白膜上使之“活化”, 30分鐘后用緩沖液沖洗，便可直接應(yīng)用。

數(shù)碼顯微鏡將固定與清洗后的細胞用過濾后的水制成濃度適宜的細胞懸液，光學顯微鏡懸滴在已鋪好膜的玻片或塑料片上，在濕潤、低溫(40C)環(huán)境中放置(30-120)分鐘，使細胞附著到膜上。用細鑷子夾起玻片在清潔的雙蒸水中振蕩，光學顯微鏡洗去未附著的細胞。光學顯微鏡對玻片厚度的要求偏光顯微鏡然后迅速放入盛有50%丙酮〔或乙醉)的器皿中。脫水過程是將玻片每隔約3分鐘，依次放入濃度遞增的丙酮或乙醉中，光學顯微鏡或在放玻片的器皿中不斷增加脫水劑濃度。據(jù)作者所在實驗室經(jīng)驗，后一種操作比較方便。光學顯微鏡具體做法可每隔3分鐘將器皿中的脫水劑吸出一半，再加入濃度為100%的等量脫水劑。經(jīng)過5-6次操作，光學顯微鏡對玻片厚度的要求顯微鏡價格器皿中脫水劑濃度達0.5%以上，細胞脫水成功。臨界點干燥后將玻片或塑料片用導電膠粘于樣品墩上進行金屬鍍膜。利用第三種方法鋪設(shè)的膜附著細胞也有方便之處。光學顯微鏡可將經(jīng)低濃度戊二醛固定后的細胞懸滴在“活化”后的蛋白膜上，光學顯微鏡對玻片厚度的要求放置10分鐘，將玻片或塑料片浸于2%戊二醛中，30分鐘后用過濾雙蒸水沖清，再按上述方法脫水、干操及金屬鍍膜。

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