對(duì)話科學(xué)家：膜電阻測(cè)量的FAQs

EVOM2是WPI全球?qū)＠�產(chǎn)品，是最新一代用于特異性完成組織培養(yǎng)研究中TEER測(cè)量的電阻儀。它不僅可以定性地測(cè)量單層貼壁細(xì)胞的健康狀態(tài)，而且也能定量地測(cè)量單層細(xì)胞的融合情況，可用于上皮細(xì)胞、胃腸道和呼吸道黏膜細(xì)胞、血管上皮細(xì)胞及血腦屏障等培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的評(píng)價(jià)以及藥效動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)。

獨(dú)特的EVOM2電路設(shè)計(jì)和STX2電極的完美結(jié)合，讓其可以監(jiān)測(cè)單層細(xì)胞的融合狀態(tài)，當(dāng)與WPI公司設(shè)計(jì)的EndOhm小室結(jié)合使用時(shí)，它也可以用來(lái)完成更加精確的定量測(cè)量或更低電阻的測(cè)量，如血腦屏障(BBB)內(nèi)皮生長(zhǎng)電阻測(cè)量。

下面，我們就大家常見(jiàn)的幾個(gè)問(wèn)題進(jìn)行詳細(xì)的解答。

1、EVOM2的工作原理是什么？

EVOM2 的工作原理是通過(guò)主機(jī)產(chǎn)生一個(gè)10 μA的恒定跨膜電流，同時(shí)以一定的頻率反轉(zhuǎn)電極的極性，這樣電極和膜都沒(méi)有電荷累積，通過(guò)STX2 的兩個(gè)電流電極（I1和I2）使10 μA 的電流跨過(guò)細(xì)胞膜，另一對(duì)電極（V1和V2）測(cè)量要求達(dá)到10 μA電流所需要的電壓，并將信息發(fā)送給處理器。處理器根據(jù)歐姆定律將其轉(zhuǎn)化為歐姆，在讀數(shù)表上顯示數(shù)字。因?yàn)殡娏魇枪潭ǖ?/SPAN>10 μA，因此，很容易就轉(zhuǎn)化出測(cè)量結(jié)果。如在膜電阻為1000 Ω時(shí)，10 μA電流通過(guò)的電壓應(yīng)該是10 mV；在200 Ω膜電阻時(shí)，10 μA的電流將產(chǎn)生2 mV的電壓；不論何種情況，在膜或電極上所消耗的能量都非常小。

2、什么是EndOhm小室？它與STX2電極有什么不同？

Endohm作為EVOM2可選電極室，可用來(lái)測(cè)量低電阻培養(yǎng)細(xì)胞或者高精度測(cè)量。Endohm與EVOM2一起使用是目前市場(chǎng)上最精確、最經(jīng)濟(jì)的一組內(nèi)皮細(xì)胞電阻儀。

小室和蓋子每一個(gè)都包含一對(duì)同中心電極：在中心有一個(gè)電壓敏感性的銀/氯化銀半電極，外加一個(gè)環(huán)狀的電流電極，電極上部的高度可以調(diào)節(jié)以便適應(yīng)不同廠家生產(chǎn)的培養(yǎng)杯。對(duì)稱的圓形盤(pán)狀電極放置于膜的上部和下部，使其比STX2有更加均一的電流密度跨過(guò)膜兩側(cè)，大大提高了測(cè)量的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。與STX2最大的不同是培養(yǎng)皿必須從培養(yǎng)板轉(zhuǎn)運(yùn)至Endohm進(jìn)行測(cè)量，Endohm小室對(duì)滲漏組織測(cè)量提供了更加方便和經(jīng)濟(jì)的解決方案。

3、怎樣進(jìn)行電極的預(yù)處理？

測(cè)量電阻時(shí)：不需要進(jìn)行任何預(yù)處理，可以直接從干儲(chǔ)存環(huán)境中取出使用。

測(cè)量電壓時(shí)：電極使用前則需要平衡。為了確保電壓穩(wěn)定性和較低的電極間電勢(shì)差，關(guān)閉EVOM2電源（O），并且在電極連接到EVOM2時(shí)，將電極浸入到點(diǎn)解液中(0.1–0.15M KCl)。當(dāng)STX2 電壓電極連接到設(shè)備且關(guān)閉電源時(shí)，在內(nèi)部會(huì)形成短路。當(dāng)電壓電極回路短路幾小時(shí)后，電極間的不對(duì)稱電勢(shì)差就會(huì)減小，內(nèi)部電極直流電勢(shì)差只有幾毫伏甚至更少，同時(shí)十分穩(wěn)定。在干燥環(huán)境中，平衡電極需要24小時(shí)；在溶液中，平衡電極需要2小時(shí)。

4、怎么清理我的電極？

（1）清潔STX2電極表面

在使用中，電極表面可能被蛋白質(zhì)或其他物質(zhì)覆蓋。這種堆積或污染，會(huì)導(dǎo)致系統(tǒng)效率的降低，引起10-20mV電壓誤差，或者讀數(shù)不穩(wěn)（電阻測(cè)量不受影響）。如果需要解決這個(gè)問(wèn)題，可以按以下步驟重新氯化電極或者清潔電極表面。

重新氯化：將電極浸入未經(jīng)稀釋的家用漂白水3分鐘，浸泡后用清水立即沖洗，盡管這將重新氯化電極表面，但是不能糾正誤差。（注意事項(xiàng)：確保只有電極尖端置于漂白液中，不能將漂白液接觸電極上部。）

電極表面拋光：用600級(jí)砂紙輕輕打磨STX2的電壓電極頂端內(nèi)側(cè)的銀質(zhì)小球(圖9)，輕輕除去銀質(zhì)小球的表層即可。（注意事項(xiàng)：多次重復(fù)打磨最終會(huì)除去所有的 Ag/AgCl 小球，如果打磨不再改善電壓讀數(shù)時(shí)，則需要更換電極。若沒(méi)有600級(jí)砂紙，可用橡皮擦代替。）

（2）對(duì)STX2電極消毒

STX2 電極是未經(jīng)消毒的。可以用酒精、環(huán)氧乙烷、紫外線或者殺菌劑消毒，不可以用用高壓滅菌器消毒。（注意事項(xiàng)：電極每次在酒精中的浸泡時(shí)間不能超過(guò)30分鐘。在酒精里長(zhǎng)時(shí)間的浸泡，會(huì)破壞電極表面的保護(hù)層，從而縮短電極使用壽命。）

（3）電極存儲(chǔ)

短期存儲(chǔ)（兩周以內(nèi)）：浸泡電極尖端在電解液中。確保電極線纜插頭連接到EVOM2設(shè)備，以便保證系統(tǒng)內(nèi)部短路并且保證電極對(duì)稱性。

長(zhǎng)期存儲(chǔ)（兩周以上）：長(zhǎng)期存儲(chǔ)時(shí)，電極要用蒸餾水清洗并且放置在干燥、黑暗處。

（注意事項(xiàng)：當(dāng)電極暴露在強(qiáng)光或者紫外線中時(shí)，電極表面會(huì)形成一層黑色氧化膜，通常，氧化膜不會(huì)影響電極性能，為了避免氧化膜的行成，應(yīng)該避光儲(chǔ)存。）

5、EVOM2目前可用于哪些研究領(lǐng)域？

1. 用于研究血腦屏障內(nèi)皮細(xì)胞的藥物和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)；

2. 用于CaCo-2大腸癌細(xì)胞或其它粘膜或上皮癌細(xì)胞的藥效學(xué)研究。

3. 用于培養(yǎng)的腸道粘膜細(xì)胞的藥物吸收和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)研究；

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