高效液相色譜法青檢測青蒿素

青蒿素是從中藥黃花蒿中分離的具有抗惡性瘧疾激勵的一種化合物，呈無色針狀結(jié)晶。黃花蒿（Artemisia annua Linn）為中國傳統(tǒng)中草藥。其有效成分—青蒿素具有良好的抗瘧效果。目前青蒿素用于瘧疾防治的價值已被人類認識和接受，世界衛(wèi)生組織已把青蒿素的復(fù)方制劑列為國際上防治瘧疾的首選藥物。

中國知名科學(xué)家屠呦呦根據(jù)《肘后備急方》等中醫(yī)藥古典文獻描述，經(jīng)過艱苦卓絕的努力并從獲取靈感，先驅(qū)性地發(fā)現(xiàn)了青蒿素。2015年10月5日，瑞典卡羅琳醫(yī)學(xué)院宣布，將諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎授予中國藥學(xué)家屠呦呦以及愛爾蘭科學(xué)家威廉•坎貝爾和日本科學(xué)家大村智，表彰他們在寄生蟲疾病治療研究方面取得的成就。日前，屠呦呦女士在瑞典首都斯德哥爾摩音樂廳舉行的2015年諾貝爾獎頒獎儀式上正式領(lǐng)取諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。

青蒿素對瘧原蟲紅內(nèi)期有直接殺滅作用。對實驗動物毒性很低，在機體內(nèi)吸收快、分布廣、排泄快。青蒿素抗瘧機理是干擾了瘧原蟲的表膜——線粒體的功能。本品治療間日瘧、惡性瘧平均原蟲轉(zhuǎn)陰時間快于氯喹，臨床治療中未見毒副作用，特別在抗氯喹原蟲株地區(qū)治療惡性瘧和腦型瘧更顯示出其優(yōu)越性。通過對青蒿素進行結(jié)構(gòu)改造，找到的新的衍生物——甲基青蒿素和青蒿酯鈉——具有更好的效果，甲基青蒿素口服劑量只需青蒿素的 l/6～1/8，且無苦味；青蒿酯鈉易溶于水，可用于兇險型瘧疾的靜脈注射搶救。

中國藥典中對青蒿素檢測作出了明確規(guī)定。RephiLe根據(jù)藥典與相關(guān)文獻推出青蒿素含量檢測解決方案。該方案采用HPLC檢測。詳細解決方案如下：

一、實驗方法

高效液相色譜法（HPLC）。

二、儀器和試劑

高效液相色譜儀，超聲振蕩儀，PURIST 超純水系統(tǒng)。

甲醇。

三、試驗方法

1、色譜條件

采用迪馬公司 Diamonsil C18 色譜柱，甲醇-水（75 : 25）流動相；流速 1 mL/min；ELSD 溫度 40℃，載氣壓力 3.5 bar，放大系數(shù) 9；進樣體積 20 μL。

2、標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制

精準(zhǔn)配置濃度為 250 μg/mL 的青蒿素甲醇溶液，置于棕色容量

3、樣品溶液制備

稱取 1 g 樣品粉末置于三角瓶中，超聲處理 15 min，過濾，重復(fù)過濾 3 次并合并濾液減壓回收溶劑并移至 50 mL 容量瓶中，用甲醇清洗并轉(zhuǎn)移至 50 mL 容量瓶中，甲醇定量至刻度。用 0.45 μm 的 RephiQuik PTFE 過濾后得試液。

4、標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別進標(biāo)準(zhǔn)系列溶液 4 μL、8 μL、10 μL、12 μL、16 μL、20 μL 進行 HPLC 分析，然后以峰面積為縱坐標(biāo)，以青蒿素的含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5、試樣測定

吸取 10 μL 試液進行 HPLC 分析，測定其峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得試液中青蒿素的含量。

6、結(jié)果計算

樣品中青蒿素的含量按下式計算

      式中：

      X一試樣中青蒿素的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

      c一由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得進樣液中青蒿素的量，單位為微克每毫升（μg/mL）；

      V一試樣稀釋液總體積，單位為毫升（mL）；

      m一試樣質(zhì)量，單位為克（g）；

      計算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

在使用HPLC檢測時，要求必須使用符合中華人民共和國標(biāo)準(zhǔn)GB6682-2008的一級純水。其他各種標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制應(yīng)該使用二級純水。一臺合格的超純水機，其超純水水質(zhì)水質(zhì)應(yīng)該超過或達到GB以及ASTM、CAP、CLSI的一級水標(biāo)準(zhǔn)；能夠提供通過各種標(biāo)準(zhǔn)所需的3Q認證服務(wù)；可以配合前端的純水機使用。樂楓提供的Direct-Pure EDI（或Direct-Pure RO）與PURIST的組合套裝可完全滿足HPLC檢測所需。

通常試液上樣前需要過濾，除掉試液內(nèi)的顆粒及微生物，防止色譜柱堵塞、損壞泵等情況發(fā)生，保證儀器的操作性能及延長儀器使用壽命。樂楓提供PTFE、Nylon等多種針頭式過濾器，適用于各種有機相及水相的樣品過濾，保證用戶安全使用儀器。

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上海樂楓是一家具有深厚的技術(shù)背景，專業(yè)提供水純化和實驗室分離純化產(chǎn)品制造商和供應(yīng)商。發(fā)展之初，上海樂楓就樹立了尊重知識產(chǎn)權(quán)，自主創(chuàng)新的理念，積極建 立自己的品牌，目前上海樂楓已經(jīng)成為全球密理博純水系統(tǒng)兼容耗材產(chǎn)品線最齊全的供應(yīng)商，同時提供實驗室純水系統(tǒng)和實驗室樣品制備前處理針頭式過濾器等。產(chǎn)品品質(zhì)和服務(wù)被市場認可，產(chǎn)品銷往全球80多個國家和地區(qū)。

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