人25羥基維生素D3（25(OH)D3/25HVD3）試劑盒使用說明書

人25羥基維生素D3（25(OH)D3/25HVD3）試劑盒技術(shù)資料

一、本試劑盒僅供研究使用。
二、ELISA試劑盒價格：歡迎來電詢價

保存條件及有效期：

1．試劑盒保存：2-8℃。
2．有效期：6個月

檢測范圍：   48T   25 ng/L -800 ng/L
 
使用目的：

本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3）水平。用純化的人25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3），再與HRP標記的25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人25羥基維生素D3類（25(OH)D3/25HVD3）濃度。

試劑盒組成
1    20倍濃縮洗滌液    20ml×1瓶    7    終止液    3ml×1瓶
2    酶標試劑    3ml×1瓶    8    標準品（1600ng/L）    0.5ml×1瓶
3    酶標包被板    12孔×4條    9    標準品稀釋液    1.5ml×1瓶
4    樣品稀釋液    3ml×1瓶    10    說明書    1份
5    顯色劑A液    3ml×1瓶    11    封板膜    2張 
6    顯色劑B液    3ml×1/瓶    12    密封袋    1個

標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
800 ng/L    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
400 ng/L    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
200 ng/L l    3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
100 ng/L    2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
50 ng/L    1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
 
2. 加 樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣 品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

注意事項：
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2．有效期：6個月