高效液相色譜測定藥材、飲片劑制劑中的黃曲霉素

2010版藥典 黃曲霉毒素檢驗法

附錄Ⅸ V 黃曲霉毒素測定法

本法系用高效液相色譜法(附錄ⅥD)側(cè)定藥材 飲片劑制劑中的黃曲霉毒素(以黃曲霉毒B₁、黃曲霉毒索B₂、黃曲霉毒素G₁和黃曲霉毒素G₂總量計），除另有規(guī)定外，按下列方法測定。

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(10：18：42)為流動相，流速每分鐘0.8ml；采用柱后衍生法檢測。衍生溶液為0.05%的碘溶液（取碘0.5g，加人甲醇100ml使溶解，用誰稀釋至1000ml制成），衍生化泵流速每掙鐘0.3ml衍生化溫度70℃；以熒光檢測器檢測，激發(fā)波長λex=360nm(或365nm），發(fā)射波長λem=450nm。兩個相鄰色譜峰的分離度應(yīng)大于1.5。

混合對照品溶液的制備 精密量取黃曲霉毒素混和標準品（黃曲霉毒B₁、黃曲霉毒索B₂、黃曲霉毒素G₁、黃曲霉毒素G₂標示濃度分別為1.0ug/ml、0.3ug/ml、1.0ug/ml、0.3ug/ml）0.5ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，作為儲備液。精密量取儲備液1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。

供試品溶液的制備 取供試品粉末約15g（過二號篩），精密稱定，加氯化鈉3g，置于均質(zhì)瓶中，精密加入70%甲醇溶液75ml，高速攪拌2分鐘（攪拌速度大于11000轉(zhuǎn)/分鐘），離心5分鐘（離心速度2500轉(zhuǎn)/分鐘），精密量取上清液15ml，置50ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45um）濾過，量取續(xù)濾液20.0ml，通過免疫親和柱（AflaT-est@P），流速每分鐘3ml，用水20ml洗脫，洗脫液棄去，使空氣進入柱子，將水擠出柱子，再用適量甲醇洗脫，收集洗脫液，置2ml量瓶中，并用甲醇稀釋至刻度，搖勻。即得。

測定法   分別精密吸取上述混和對照品溶液5ul、10ul、15ul、20ul、25ul，諸如 液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，繪制標準曲線，另精密吸取上述供試品溶液20-25ul，注入液相色譜儀，測定峰面積，從標準曲線上讀出供試品中相當于黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒索B₂、黃曲霉毒素G₁、黃曲霉毒素G₂的量，計算，即得。

【附注】 （1）本實驗應(yīng)有相應(yīng)的安全、防護措施，并不得污染環(huán)境。

（2）殘留有黃曲霉毒素的廢液或廢渣的玻璃器皿，應(yīng)置于專用貯存容器（裝有10%次氯酸鈉溶液）內(nèi)，浸泡24小時以上，再用清水將玻璃器皿沖洗干凈。

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