注意缺陷大鼠多動(dòng)障礙模型該如何建立

注意缺陷大鼠多動(dòng)障礙模型的建立

本研究探討注意缺陷多動(dòng)障礙大鼠模型的建造技術(shù)。方法:將20只4周齡SD大鼠隨機(jī)分成模型組和對(duì)照組，模型組自由飲用0.2 mg/mL醋酸鉛溶液。28 d后運(yùn)用開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、Morris水迷宮、Lat迷宮觀察兩組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)。采用ICP一MS檢測(cè)大鼠血鉛濃度、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法法(ELISA)測(cè)定大鼠血清中多巴胺和去甲腎上腺素含量。結(jié)果:模型組在開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中大鼠穿越格子數(shù)、直立次數(shù)增多(P < 0. 05 ) ，Lat迷宮中直立次數(shù)及穿越角落的時(shí)間比例增加(P< 0. 05} ，Morris水迷宮目標(biāo)象限停留時(shí)間縮短（P <0.05）;模型組大鼠血鉛濃度高于對(duì)照組(P < 0. 05 ) ,血清多巴胺和去甲腎上腺素含量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)訓(xùn)一學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:采用自由飲用0. 2 mg/mL醋酸鉛溶液法成功建造了ADHD大鼠模型，具有ADHD基本臨床特征，可做為ADHD的動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

「關(guān)鍵詞」注意缺陷多動(dòng)障礙模型;醋酸鉛;SD大鼠;行為學(xué)檢測(cè);多巴胺;去甲腎上腺素

1材料與方法

1. 1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組20只SD大鼠,4周齡，雄性，SPF級(jí)(北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)部)，許可證號(hào):SCXK(京)2011一0012。實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)3d后，隨機(jī)分為A,B兩組(即模型組和對(duì)照組)。5只/籠(鼠籠25 cm x 45 cm x15 om)，明暗交替比12: 12 h (7: 00一19 : 00)，室溫20-22度,濕度適宜，大鼠自由進(jìn)食和飲水。

1. 2實(shí)驗(yàn)方法

1. 2. 1大鼠模型建造采用0. 2 mg/mL的醋酸鉛溶液自由飲用法建造模型，對(duì)照組自由飲用蒸餾水，余其同。

1.2.2行為學(xué)檢測(cè)

1. 2. 2. 1開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn):開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)視頻分析系統(tǒng)及開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱由上海欣軟信息科技有限公司提供。開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱由醫(yī)用有機(jī)板制成，規(guī)格為50 cm X 50 cm X 50 cm，采用九宮格為測(cè)試基底。測(cè)試前1d將大鼠放入開(kāi)場(chǎng)箱10 min適應(yīng)環(huán)境，以減少大鼠對(duì)陌生環(huán)境產(chǎn)生的焦慮而影響其活動(dòng)水平，實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)將大鼠輕輕放入中央格子，在光亮條件下，通過(guò)視頻分析系統(tǒng)自動(dòng)記錄大鼠5 min內(nèi)的活動(dòng)情況，記錄大鼠穿越的格子數(shù)、直立次數(shù)、理毛次數(shù)以及糞便數(shù)。測(cè)試期間保持周邊光線和噪聲的一致性。

1 .2. 2. 2

Morris水迷宮測(cè)試:Morris水迷宮視頻分析系統(tǒng)由上海欣軟信息科技有限公司提供， Morris水迷宮箱體(箱體由直徑155 cm，高50 cm灰白色鐵皮圓形蓄水池及同顏色平臺(tái)構(gòu)成)，池內(nèi)水深25 cm，水溫22-24 度。將水池平均分為四個(gè)象限，平臺(tái)頂端平而而積為8 cm X 8 cm，訓(xùn)練期間迷宮外參照物的位置保持不變。將大鼠置于一個(gè)象限內(nèi)，距圓心21 cm，距池壁20 cm，隱沒(méi)于水而下1.5 cm(訓(xùn)練期間平臺(tái)位置不變)。第1d不設(shè)立平臺(tái)，讓大鼠進(jìn)入水池自由游60 s進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練。從第2d開(kāi)始連續(xù)5d隨機(jī)地從四個(gè)不同象限讓大鼠進(jìn)入水中，大鼠入水尋找并逃避到平臺(tái)。視頻分析軟件記錄大鼠從入水到找到平臺(tái)所需時(shí)間(潛伏期)，若在120 s內(nèi)大鼠無(wú)法找到平臺(tái)，則由檢測(cè)者引導(dǎo)其上平臺(tái)所有大鼠上臺(tái)后均停留10 s，以利于其對(duì)空間參照物的記憶。第6d去掉平臺(tái)，讓大鼠在水中游泳120 s，記錄大鼠穿越原平臺(tái)所在位置的次數(shù)、在原來(lái)平臺(tái)所在象限所停留的時(shí)間及路程，以此評(píng)價(jià)動(dòng)物對(duì)己獲取信息的存儲(chǔ)、記憶能力。

1. 2. 2. 3  Lat迷宮:Lat迷宮視頻分析系統(tǒng)及Lat迷宮實(shí)驗(yàn)箱由上海欣軟信息科技有限公司提供。Lat迷宮實(shí)驗(yàn)箱為一個(gè)40 cm x 60 cm x 60 cm的木箱，中間放置一個(gè)30 cmx 30 cm的透明有機(jī)玻璃箱，從而產(chǎn)生一個(gè)寬15 cm、長(zhǎng)60 cm、高40 cm的通道，根據(jù)視頻分析軟件分析記錄觀察大鼠穿越角落的時(shí)間和直立次數(shù)，作為對(duì)環(huán)境刺激的非選擇性注意水平的評(píng)價(jià)指標(biāo)。

1.2.3生化指標(biāo)測(cè)定

1. 2. 3. 1血鉛濃度的測(cè)定3. 0%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠 (40 mg/kg)，腹主動(dòng)脈采血2. 5 mL于肝素抗凝管中待查;取2 mL全血于消解罐中，加8 mL濃硝酸冷消化1 h,按優(yōu)化程序進(jìn)行微波消解，電熱板160℃趕酸后，用2. 0 %硝酸定容到25 mL，搖勻待測(cè)。采用電感藕

合等離子體質(zhì)譜法(ICP一MS)測(cè)定全血中鉛含量。

1.2.3.2血清中多巴胺和去甲腎上腺素含量測(cè)定3. 0%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉大鼠(40 mg / kg)后，腹主動(dòng)脈采血4 mL于非抗凝管中，靜置3h，離心10 min (3 000rpm)，取上清1 mL，分裝到兩個(gè)EP管中，于一80℃保存?zhèn)溆谩４笫笱�清中多巴胺和去甲腎上腺素含量測(cè)定:采

用北京利維寧生物科技有限公司提供的大鼠多巴胺和去甲腎上腺素酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒。

1. 3統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 17. 0統(tǒng)計(jì)軟件，進(jìn)行兩獨(dú)立樣本資料t檢驗(yàn)。

結(jié)果：模型組在開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中大鼠穿越格子數(shù)、直立次數(shù)增多(P < 0. 05 ) ，Lat迷宮中直立次數(shù)及穿越角落的時(shí)間比例增加(P< 0. 05} ，Morris水迷宮目標(biāo)象限停留時(shí)間縮短（P <0.05）;模型組大鼠血鉛濃度高于對(duì)照組(P < 0. 05 ) ,血清多巴胺和去甲腎上腺素含量低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)訓(xùn)一學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:采用自由飲用0. 2 mg/mL醋酸鉛溶液法成功建造了ADHD大鼠模型，具有ADHD基本臨床特征，可做為ADHD的動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。