Azure biosystems 如何選擇合適的western Blot成像方法
如何選擇合適的western Blot成像方法
最合適的Western blot實驗方法取決于您期望獲得哪些信息，以下內(nèi)容將幫助您選擇最佳實驗方法。
化學(xué)發(fā)光方法
化學(xué)發(fā)光western blot是相對容易且靈敏度極高的檢測方法，靈敏度可以達(dá)到fg級。
分子量差異顯著的蛋白，通過電泳可輕松分離，使用“化學(xué)發(fā)光”檢測非常方便。
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優(yōu)勢: |
劣勢: |
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靈敏度高 容易，實驗方案熟悉 兼容膠片和數(shù)字成像 |
半定量分析 酶促反應(yīng) 僅能進(jìn)行單一信號采集，上樣量控制需要剝離和二次孵育 |
蛋白凝膠電泳:
檢測單一蛋白
確定蛋白有無
檢測抗體反應(yīng)
蛋白純度分析
檢測低豐度蛋白
化學(xué)發(fā)光，單信號，單蛋白
熒光方法
熒光Western blot使用熒光染料標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測，印跡膜上的靶標(biāo)蛋白濃度與熒光信號強(qiáng)度呈線性關(guān)系，實現(xiàn)真實可靠的定量分析。熒光染料發(fā)射光譜不同，因此在一張 印跡膜上可實現(xiàn)多重檢測。在無需剝離和二次孵育條件下，進(jìn)行上樣量質(zhì)控，分析翻譯后修飾蛋白時尤為適用。
熒光western blot使用 紅外或者可見熒光染料.
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優(yōu)勢: |
劣勢: |
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可進(jìn)行多重檢測 定量精準(zhǔn)度高 熒光近紅外印跡膜可儲存，并可重復(fù)成像 |
靈敏度略低于化學(xué)發(fā)光方法 膜自發(fā)熒光導(dǎo)致背景噪音增加 |
可見熒光檢測的優(yōu)勢
當(dāng)需要同時檢測三個蛋白時，可見熒光顯然是最佳的選擇�？梢姛晒饩邆浜芎玫撵`活性，有多種可見熒光染料可供選擇。如果您正在使用可見熒光染料（發(fā)射光譜可被區(qū)分）進(jìn)行 其它實驗，很容易將這些染料應(yīng)用于Western blot實驗中。
熒光檢測方法，可用于:
同時檢測多種蛋白
研究翻譯后修飾蛋白
同一印跡膜的上樣量質(zhì)控
多個泳道歸一化
精確定量 Western實驗
多重?zé)晒猓喾N蛋白
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