Molecular Devices CatchPoint cAMP熒光檢測試劑盒應(yīng)用方案解析

介紹：

本研究展示了如何在 SpectraMax® i3多功能酶標(biāo)儀中應(yīng)用CatchPoint® cAMP熒光試劑盒監(jiān)測腺苷酸環(huán)化酶激活劑forskolin對HEK293細(xì)胞的影響(如圖1)。G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)是重要的跨膜蛋白，能將胞外信號傳導(dǎo)入胞內(nèi)，引起信號逐級放大的級聯(lián)反應(yīng)，導(dǎo)致胞內(nèi)某些蛋白活性或表達(dá)的改變[1]。3’, 5’-磷酸化環(huán)腺苷(cAMP)作為第二信使參與GPCR活化后的下游反應(yīng)。當(dāng)胞外配體作用于GPCR時(shí)，GPCR構(gòu)象發(fā)生改變，激活胞內(nèi)連接的G蛋白。接下來的信號傳導(dǎo)路徑與被激活的G蛋白類型有關(guān)。其中當(dāng)Gs蛋白被激活時(shí)，會(huì)導(dǎo)致腺苷酸環(huán)化酶活化引起的胞內(nèi)cAMP濃度上調(diào)，進(jìn)一步激活蛋白激酶A，最終促進(jìn)一些目標(biāo)蛋白的磷酸化，這些目標(biāo)蛋白可能參與了例如多巴胺神經(jīng)信號傳導(dǎo)、葡萄糖再生反應(yīng)、血管擴(kuò)張、細(xì)胞有分裂、卵子成熟等重要生理生化過程[2-6]。CatchPoint® cAMP熒光檢測試劑盒采用免疫競爭原理測得cAMP濃度(如圖2)，僅需一步洗脫，且反應(yīng)底物加入后短可放置10分鐘，長可延至24小時(shí)后再檢測，信號穩(wěn)定靈敏。