貼壁/懸浮細胞及組織切片進行Hoechst染色的方法步驟

Hoechst染色方法

1．貼壁細胞
1)   取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間，無菌超凈臺內吹干或用細胞培養(yǎng)PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍，再用細胞培養(yǎng)液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內，種入細胞培養(yǎng)過夜，使約為50%-80%滿。
2)   刺激細胞發(fā)生凋亡后，吸盡培養(yǎng)液，加入0.5ml固定液，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。
3)   去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。
4)   加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動數(shù)次。
5)   用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
6)   滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上貼有細胞的蓋玻片，盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液，切勿弄反。
7)   熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。
 
2. 懸浮細胞
1)   離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內，加入0.5ml固定液，緩緩懸起細胞，固定10分鐘或更長時間（可4℃過夜）。
2)   離心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。洗滌期間手動晃動。
3)   最后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體，再緩緩懸起細胞，滴加至載玻片上，盡量使細胞分布均勻。
4)   稍晾干，使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動。
5)   均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體，微晾干。
6)   用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
7)   滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
8)   H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。
 
3. 組織切片
1)   常規(guī)包埋切片后，脫蠟，透明。
2)   PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘，吸盡液體。洗滌時宜用搖床，或手動晃動數(shù)次�？稍诹�孔板中操作。
3)   加入0.5ml Hoechst 33258染色液，染色5分鐘。也宜用搖床，或手動晃動。
4)   用PBS或0.9%NaCl洗兩遍，每次3分鐘。
5)   將切片置于載玻片上，滴一滴抗淬滅封片液，蓋上一潔凈的蓋玻片，盡量避免氣泡。
6)   熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。