D-熒光素鉀鹽使用方法及常見問題解答

D-熒光素鉀鹽是熒光素酶的水溶性底物，存在于多種發(fā)光生物體中。在ATP和熒光素酶的催化作用下，D-熒光素鉀被氧化，產(chǎn)生藍(lán)綠色的光(560nm)，當(dāng)?shù)孜镞^量時(shí)，產(chǎn)生的光量子數(shù)與熒光素酶的濃度呈正相關(guān)。編碼熒光素酶的Luc基因是植物、細(xì)菌、哺乳動(dòng)物細(xì)胞的常用報(bào)告基因。由于沒有背景干擾，因此可以很容易地檢測出低至0.02 pg 水平的熒光素酶。

D-熒光素鉀鹽可使luc標(biāo)記基因和熒光素酶融合蛋白在活細(xì)胞、組織和生物體的表達(dá)成像，廣泛應(yīng)用于報(bào)告基因的分析、免疫測定和衛(wèi)生監(jiān)控。

化學(xué)名稱：4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt
CAS  號(hào)：115144-35-9
分子式：C11H7N2O3S2K
分子量：318.42 g/mol
純度：99.7 %（HPLC）

應(yīng)用

體外熒光檢測：熒光素的配制

試劑：
D-熒光素鉀鹽（Gold Biotechnology catalog ID: LUCK）
分子生物學(xué)級(jí)水

培養(yǎng)基

操作步驟：
1、 用分子生物學(xué)級(jí)水準(zhǔn)備一個(gè)30mg/L（200×）的儲(chǔ)存液。
a． 反復(fù)巔倒翻轉(zhuǎn)直到熒光素完全溶解。
b． 可以現(xiàn)配現(xiàn)用，或者分裝好保存于-20℃。
2、 加配好的熒光素儲(chǔ)存液到預(yù)溫的組織培養(yǎng)基中，使熒光素的終濃度為：150ug/ml。
3、 吸出培養(yǎng)細(xì)胞（沒有培養(yǎng)基殘留）。
4、 在成像前立即加入150ug/ml的熒光素溶液到細(xì)胞中。
a． 為了加強(qiáng)信號(hào)，在成像前可以把培養(yǎng)好的細(xì)胞在37℃中短暫的孵育。
 
小鼠活體內(nèi)熒光檢測：熒光素的配制

試劑：
D-熒光素鉀鹽（Gold Biotechnology catalog ID: LUCK）
DPBS不含Mg2+和Ca2+
操作步驟：
1、 溶熒光素于DPBS中終濃度為：15mg/ml。
2、 用0.2um 濾膜濾滅溶液。
3、 每個(gè)小鼠每克體重注射10ul（15mg/ml）熒光素儲(chǔ)存液。
4、 成像前10-15min內(nèi)注射小鼠腹腔內(nèi)。
a．應(yīng)用于每個(gè)動(dòng)物模型的熒光動(dòng)力學(xué)研究，以確定峰值信號(hào)時(shí)間。
 
關(guān)于D-熒光素鉀鹽的常見問題回答：

1、 熒光素可以用于動(dòng)物活體嗎？

答：我們?cè)S多客戶用熒光素作用于動(dòng)物活體，目前世界上合成熒光素主要有兩大生產(chǎn)商，因此目前您使用的就是這兩種生產(chǎn)商其中之一生產(chǎn)的。請(qǐng)注意：Promega出售的熒光素是Beetle Luciferin，而我們公司出售的是Firefly Luciferin，但這兩種的結(jié)構(gòu)是相同的（結(jié)構(gòu)式如下）。

2、 怎么溶解熒光素？溶解后怎樣使它穩(wěn)定？

答：許多客戶已經(jīng)告訴我們熒光素溶于水中，然后分裝好保存于-80℃，不會(huì)有重大的影響。然而，關(guān)于溶解后熒光素的穩(wěn)定性也有相矛盾的報(bào)道。對(duì)于大多敏感的實(shí)驗(yàn)，為了減少一些實(shí)驗(yàn)中的可變因素我們強(qiáng)烈建議您現(xiàn)配現(xiàn)用（比如低濃度的酶或者不合適的反應(yīng)溫度或不合適的鹽濃度等等可能需要高濃度的底物來驅(qū)使反應(yīng)的完成。）