汽化過(guò)氧化氫對(duì)含有蟯蟲(chóng)污染的動(dòng)物籠具的消毒研究
實(shí)驗(yàn)室的嚙齒動(dòng)物經(jīng)常被檢測(cè)到有蟯蟲(chóng)感染（1）。將感染了蟯蟲(chóng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)，這不僅干擾影響了科學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)論正確性，降低科研的科學(xué)性、準(zhǔn)確性及穩(wěn)定性，而且還可能威脅研究人員的健康。
蟯蟲(chóng)發(fā)展有直接的生命周期，一般需要7~15天完成卵到成蟲(chóng)的變化。成蟲(chóng)主要在盲腸中發(fā)現(xiàn)。通過(guò)攝取雌蟲(chóng)在宿主肛門(mén)周邊儲(chǔ)存的卵子可以發(fā)現(xiàn)蟯蟲(chóng)感染的傳播是水平性的，即主要通過(guò)粘膜傳播。蟯蟲(chóng)卵在小腸內(nèi)釋放與孵化大約6小時(shí)之后，開(kāi)始變得具有傳染性。幼蟲(chóng)以?xún)?nèi)腔中的細(xì)菌為食，經(jīng)過(guò)7~11天之后它們?cè)诿つc中成熟。一只雌蟲(chóng)大約會(huì)釋放450~550個(gè)卵（2）。這些卵具有頑強(qiáng)生命力，并很容易擴(kuò)散，形成廣泛的污染。它們?cè)谑覝叵驴梢源婊詈荛L(zhǎng)時(shí)間，使用普通消毒劑很難消除（3）。
本文研究試圖探討過(guò)氧化氫蒸汽熏蒸法是否能成功殺滅污染了動(dòng)物籠具的蟯蟲(chóng)卵。
動(dòng)物與實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
實(shí)驗(yàn)分為3組進(jìn)行，每組重復(fù)三次。每次有5只雄性、4周齡大的SCID小鼠。所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均為干凈動(dòng)物，無(wú)體內(nèi)寄生蟲(chóng)。將它們暴露在被蟯蟲(chóng)污染過(guò)的鼠墊料籠子上，置于通風(fēng)架，在無(wú)菌條件下飼養(yǎng)。在把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放置這些臟籠子之前，這些臟籠子被以三種方式先進(jìn)行處理：
1、 測(cè)試組：在30℃的室溫下使用過(guò)氧化氫熏蒸15分鐘；
2、 陰性對(duì)照組：在121℃的高溫下，高壓消毒20分鐘；
3、 陽(yáng)性對(duì)照組：無(wú)任何處理。
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物接觸臟籠子兩周后，將所有動(dòng)物轉(zhuǎn)移回干凈的籠子。接著經(jīng)過(guò)四周后，采取肛門(mén)膠紙粘試法測(cè)試；并再過(guò)兩周后殺死所有動(dòng)物，對(duì)它們進(jìn)行直接的盲腸檢查。
感染的檢測(cè)
① 肛門(mén)膠紙粘試法：使用20*30mm的干凈膠帶條粘拭所有動(dòng)物的肛門(mén)周?chē)つw，然后貼在載玻片上，使用顯微鏡放大100倍檢測(cè)卵子。
② 蟯蟲(chóng)直接檢測(cè)法：解剖動(dòng)物尸體，取盲腸內(nèi)容物置于裝有溫生理鹽水的培養(yǎng)皿中，再使用解剖顯微鏡進(jìn)行10~20倍的放大倍數(shù)檢查。
結(jié)果
①
|
Treatment Group |
1st test |
2nd test |
3rd test |
Total |
|
soiled bedding fumigated |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/15 |
|
Soiled bedding autoclaved |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/15 |
|
Soiled bedding untreated |
5/5 |
5/5 |
5/5 |
15/15 |
②
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Treatment Group |
1st test |
2nd test |
3rd test |
Total |
|
soiled bedding fumigated |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/15 |
|
Soiled bedding autoclaved |
0/5 |
0/5 |
0/5 |
0/15 |
|
Soiled bedding untreated |
5/5 |
5/5 |
5/5 |
15/15 |
1、 汽化過(guò)氧化氫熏蒸后的墊料組：重復(fù)三次均未發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)鼠感染蟯蟲(chóng)；
2、 高溫高壓滅菌后的墊料組：重復(fù)三次均未發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)鼠感染蟯蟲(chóng)；
3、 未經(jīng)任何處理的墊料組：重復(fù)三次均發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)鼠感染蟯蟲(chóng)。
討論
研究背景與目的
對(duì)蟯蟲(chóng)感染的鼠繁殖群，未經(jīng)環(huán)境消毒的情況下，用兩種不同的伊維菌素治療方案均未能消除鼠蟯蟲(chóng)。文獻(xiàn)有爭(zhēng)議性地討論了環(huán)境消毒的必要性（2,5）。進(jìn)一步說(shuō)，關(guān)于對(duì)環(huán)境中嚙齒動(dòng)物蟯蟲(chóng)卵的生存以及它們對(duì)普通生理鹽水的敏感性的研究數(shù)據(jù)非常有限（2）。本研究的目的是為了了解過(guò)氧化氫熏蒸法能否成功殺滅蟯蟲(chóng)卵，并結(jié)合抗菌治療研究能否消除大鼠體內(nèi)的寄生蟯蟲(chóng)。
研究設(shè)計(jì)
在初步實(shí)驗(yàn)中,成熟雌性蟲(chóng)子宮內(nèi)的卵在經(jīng)過(guò)15分鐘的過(guò)氧化氫熏蒸后被完全破壞。然而，肛周膠紙粘試法顯示成熟的卵沒(méi)有這種被破壞效果，測(cè)試顯示成熟卵未有明顯的微觀病變，可能是由于成熟卵的殼太厚并更有抵抗力。因此，研究決定用高度敏感的SCID小鼠作為生物測(cè)試模型進(jìn)行體內(nèi)感染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。在一個(gè)成功的實(shí)驗(yàn)里，這些動(dòng)物如果置放在未經(jīng)處理的污染墊料上，應(yīng)該都要被感染（陽(yáng)性對(duì)照組）。經(jīng)過(guò)過(guò)氧化氫熏蒸（測(cè)試組）或高溫高壓消毒（陰性測(cè)試組）的墊料上的所有老鼠應(yīng)該保持干凈狀態(tài)。根據(jù)文獻(xiàn)，感染了蟯蟲(chóng)的大鼠有一個(gè)短暫的潛伏期，約7~8天（6）。在本研究中，為了避免假陰性結(jié)果的發(fā)生，實(shí)驗(yàn)延長(zhǎng)了揭露時(shí)間與觀察時(shí)間（2周+6周），確保所有動(dòng)物受感染有充足的時(shí)間范圍。
方法細(xì)節(jié)
我們的實(shí)驗(yàn)使用了小型的高壓艙進(jìn)行熏蒸。由于艙體相對(duì)較小，滅菌過(guò)程相對(duì)加快。此外，更容易獲得高濃度的過(guò)氧化氫接觸。由于蟯蟲(chóng)卵對(duì)普通的消毒劑具有很強(qiáng)的抵抗力，我們選擇了相對(duì)高濃度的過(guò)氧化氫。在殺菌階段，總共注入了75g 30%濃度的過(guò)氧化氫溶液。這相當(dāng)于每立方米有27.57g過(guò)氧化氫溶液或8.27g純的過(guò)氧化氫。相對(duì)于之前用于動(dòng)物房的消毒，這次的過(guò)氧化氫濃度約有兩倍（7）。這些積極的結(jié)果使得可以開(kāi)始大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)測(cè)試。希望將來(lái)能有更詳細(xì)的研究精確定義過(guò)氧化氫使蟯蟲(chóng)卵失活的劑量依賴(lài)性。
結(jié)論
本文的研究明確證明了使用過(guò)氧化氫熏蒸能完全使蟯蟲(chóng)卵對(duì)易受宿主失去感染力。本實(shí)驗(yàn)方法可推薦用于有效消除蟯蟲(chóng)污染的動(dòng)物籠具，同時(shí)可用于熱敏性設(shè)備的清潔比如通風(fēng)架、鼓風(fēng)機(jī)、凈化工作臺(tái)，以及其他電子設(shè)備（電腦、天平稱(chēng)、行為測(cè)試設(shè)備）。
參考文獻(xiàn)：
(1)Jacoby,R.andJ.R.Lindsey(1988):ILARJ.39:266-271. (2)Pritchett,K.R.andN.A.Johnston(2002):Contemp.Top.Lab.Anim.41:36-46.
(3)Suckow.M.A.etal.(2001):The laboratory mouse.CRC Press,80-82.
(4)Krause,J.and H.Riedesel(2002):Lab.Anim.(submitted).
(5)Huerkamp.MJ.etal(2000):Contemp.Top.Lab.Anim.34:76-83.
(6)Lewis.J.W.andJ.D’Silva(1986):J.Helminthol.60:39-46.
(7)KrauseJ.etal(2001):Contemp.Top.Lab.Anim.40:18-21.
