無DMSO、無血清干細胞凍存技術(shù)與使用（非程序降溫）
含DMSO的凍存液
DMSO是最常用的滲透性冷凍保護劑，廣泛應(yīng)用于細胞的冷凍保存。在細胞水平，DMSO除了是一種DNA致畸因子外，還可滲入細胞內(nèi)，分子中S=O鍵可能與細胞內(nèi)蛋白發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，致使蛋白變性。因此，有些細胞和組織細胞對DMSO敏感，使用含DMSO的細胞冷凍液會降低細胞復(fù)蘇后活性，進而影響細胞的功能。臨床上，使用經(jīng)DMSO凍存的細胞會引發(fā)廣泛的身體不適，最常見的是腹瀉（約50%），嚴(yán)重的會造成患者神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)損傷甚至死亡（0.2%）。
在沒有可替代DMSO的冷凍保護劑以前，為了降低DMSO的毒性，通常采用兩種方法——降低凍存液中DMSO的含量以及復(fù)蘇后洗滌除去DMSO殘留。因此，研究者針對不同細胞開發(fā)了2.5~10%DMSO并且添加其它不同冷凍保護劑的復(fù)合配方。但這些不同種類改良的DMSO凍存液因成分復(fù)雜，濃度各異，難以標(biāo)準(zhǔn)化地推廣用于多種細胞類型。臨床上，使用DMSO冷凍保存的細胞，細胞復(fù)蘇后最好應(yīng)洗滌并離心2次，盡可能除去將殘留的DMSO，減少不良后果。細胞治療領(lǐng)域的科學(xué)家和醫(yī)生多年來在研發(fā)和尋找無DMSO、低毒/無毒性、冷凍保存效果顯著的新型細胞凍存液。
無DMSO凍存液
LiveCyte® DMSO-free的有效成分是單一的兩性高分子氨基酸衍生物，不含任何其它冷凍保護成分。這種高分子化合物不會滲透細胞。低溫冷凍時，它通過吸水，一方面導(dǎo)出細胞內(nèi)的水分子，另一方面在細胞膜外形成保護層，抑制冰晶形成和生長，從而避免細胞受到冷凍損傷。值得一提的是，該成分是天然化合物，可被細胞和機體代謝為氨基酸，不會產(chǎn)生毒副作用。
我們經(jīng)過反復(fù)實驗證明，LiveCyte® DMSO-free完全可以替代經(jīng)典的DMSO凍存技術(shù)。無DMSO、無動物源/人源成分的凍存液將可以避免DMSO對細胞功能和人體的潛在危害，避免潛在的動物源感染，并且質(zhì)量穩(wěn)定可控。因此，LiveCyte® DMSO-free是一款非常適宜于臨床使用的細胞凍存產(chǎn)品。另外，我們竭力研發(fā)省時、省力的細胞凍存產(chǎn)品。使用時，LiveCyte® DMSO-free比經(jīng)典的DMSO凍存液更便捷，可節(jié)省大量時間，也不需要添購其它凍存裝置，可減少不必要的資金投入。
典型產(chǎn)品與功能
LiveCyte® DMSO-free凍存效果能夠達到經(jīng)典的DMSO凍存液。
使用說明書
LiveCyte®DMSO-free細胞冷凍液的有效組分為氨基酸衍生物，成分簡單明確，不含DMSO、不含任何人源或動物源成分。
DMSO是常用的滲透性冷凍保護劑，使用廣泛。但某些類型的細胞對DMSO敏感，使用含DMSO的細胞冷凍液可能會影響細胞的功能，尤其是干細胞。臨床上直接使用經(jīng)DMSO凍存的細胞會引發(fā)嘔吐和腹瀉，還會造成神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)等組織損傷。
使用方法：
1. 檢查并確認細胞沒有真菌、細菌、支原體污染。
2. 凍存前的細胞處于對數(shù)生長期最佳。
3. 計數(shù)待凍存的細胞數(shù)量。懸浮細胞應(yīng)180g離心5~10min后除去培養(yǎng)基，貼壁細胞應(yīng)消化后計數(shù)，再離心除去培養(yǎng)基。
4. 計算應(yīng)使用的LiveCyte® DMSO-free體積。首先確定細胞凍存密度（可用密度為2~40×106/ml，最佳密度為4~20×106/ml）。
5. 吸取適量LiveCyte® DMSO-free，重懸細胞，立即0.5ml/管分裝至細胞凍存管（可凍存體積為0.2~1ml/管，最佳體積為0.5ml/管）。
6. 立即將凍存管移入-80℃低溫冰箱，不能采取任何程序降溫措施或使用程序降溫裝置。如果無法立即移入-80℃低溫冰箱，至少應(yīng)當(dāng)先移入0℃以下環(huán)境中（如-20℃冰箱）短暫存放10min左右，同樣不能采取程序降溫。凍存液重懸后的細胞不能在室溫或2~8℃靜置超過10min以上。
7. -80℃冰箱過夜后的凍存管，要立即移入液氮中儲存，不可于-80℃長期凍存。
8. 復(fù)蘇時，先準(zhǔn)備室溫或37℃預(yù)溫的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，再37℃水浴凍存管，不斷輕搖，待剩余1粒米大小的冰塊時，迅速移出水浴。然后按1：15~1：30稀釋比例，立即用基礎(chǔ)培養(yǎng)基稀釋融化的細胞懸液，接著180g離心5~10分鐘，再重懸細胞使用。
9. 本品僅供研究使用。
