石蠟切片的制備指南（中）

前言:

制備高質(zhì)量的病理切片需要一定的技巧和經(jīng)驗(yàn)。

該教程的目的是協(xié)助初學(xué)者熟悉石蠟切片的制備，以及作為經(jīng)驗(yàn)更豐富的技術(shù)專(zhuān)家的進(jìn)修課程。涵蓋輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)制備石蠟切片的設(shè)置和操作相關(guān)的基本內(nèi)容。同時(shí)對(duì)切片過(guò)程中的部分常見(jiàn)故障進(jìn)行具體說(shuō)明，并提供故障排除建議。

06 設(shè)定最佳刀片間隙角

刀片間隙角可調(diào),必須進(jìn)行恰當(dāng)設(shè)定以達(dá)到最佳性能。

間隙角可防止刀面和蠟塊表面接觸。

切面角是形成切削刃的兩個(gè)切面之間的角度。對(duì)于常規(guī)使用的刀片和可調(diào)換式刀片,切面角大約為35°°,但該角度可能因刀片類(lèi)型和制造商的不同而發(fā)生

因此,必須針對(duì)每種刀片類(lèi)型設(shè)定最佳間隙角。

在進(jìn)行角度設(shè)定時(shí),應(yīng)遵循切片機(jī)制造商指南。對(duì)于Leica生物系統(tǒng)的刀片和刀片架,推薦的設(shè)定角度為1至5°

07刀片最長(zhǎng)使用壽命

采用一些簡(jiǎn)單的策略可使每個(gè)刀片均達(dá)到最長(zhǎng)的使用壽命。

清潔刀片時(shí),避免沿刀刃拖動(dòng)任何物品。即使是纖維素纖維亦可以對(duì)刀片造成損壞。

避免刀刃接觸任何硬質(zhì)物體,如鉗子或刷子。

有條不紊的使用刀片,從一端工作至另一端。這將使刀片的每一部分均達(dá)到最大使用壽命。

使用刀片的一部分進(jìn)行修塊,使用另一部分進(jìn)行最終切片,或者使用獨(dú)立刀片進(jìn)行此兩個(gè)步驟。

回縮式切片機(jī)可在刀片上行運(yùn)動(dòng)過(guò)程中使蠟塊與刀片脫離接觸,從而使刀片壽命最大化,且可防止刀片復(fù)位過(guò)程中產(chǎn)生碎片。

08確定定向蠟塊

切割沖程中蠟塊與刀片的定向可以影響獲取帶狀物的難易程度,并可直接影響切片的質(zhì)量。

在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室,所有包埋盒均按照相同的方向被置于樣本夾上(如東-西方向且標(biāo)簽向左,或北南方向且標(biāo)簽向上)。這樣處理的目的在于在制備高質(zhì)量切片之前對(duì)多個(gè)蠟塊進(jìn)行粗修,并允許對(duì)組織進(jìn)一步切割或再切割。且不會(huì)造成組織損耗過(guò)大。因此,在包埋階段即必須考慮到蠟塊與刀片的相對(duì)方向,此要求經(jīng)常被忽視。

圖A為部分典型蠟塊的最佳取向。針對(duì)特定的蠟塊類(lèi)型,何種取向?yàn)樽罴芽赡艽嬖诓煌�意�?jiàn),但必須意識(shí)到取向的重要性并加以考慮。

例A.腸:刀片持續(xù)性通過(guò)粘膜

例B子宮頸:最好是將組織致密處呈遞至刀片,而非直邊。

例C皮膚:刀片持續(xù)性通過(guò)表皮

切片機(jī)(如RM2235)還配備有可進(jìn)行校準(zhǔn)控制的精密定位裝置,可以在x/y軸上很容易找到零點(diǎn)或可測(cè)量的變量。此項(xiàng)功能非常有助于對(duì)其他實(shí)驗(yàn)室制備的蠟塊或已經(jīng)過(guò)其他切片機(jī)切割的蠟塊進(jìn)行再切割,因?yàn)槠湫枰�精確對(duì)齊以防止不必要的組織損失。同時(shí)對(duì)多個(gè)蠟塊進(jìn)行切割時(shí)應(yīng)常規(guī)使用,重要的是在開(kāi)始切割之前夾持架應(yīng)被設(shè)定至x/y軸的零位置。通過(guò)采用指示器(紅色)、切口點(diǎn)(點(diǎn)擊停止)和指示標(biāo)記即可非常容易地實(shí)現(xiàn)此設(shè)定。

（圖A）

09了解切片機(jī)的設(shè)計(jì)特點(diǎn)及其使用方法

回縮式切片機(jī)的設(shè)計(jì)理念在于標(biāo)本上行沖程中回縮,讓蠟塊遠(yuǎn)離刀片。重要的是要知道您所使用的切片機(jī)是否具備此功能。

回縮是切片機(jī)的設(shè)計(jì)特點(diǎn)之一,可在切片過(guò)程中提供獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)并可延長(zhǎng)刀片壽命。

當(dāng)使用回縮式切片機(jī)時(shí),蠟塊下行沖程中必須將蠟塊表面對(duì)齊刀口(即處于前出位置,而非退縮位置)。

當(dāng)標(biāo)本夾處于退縮位置時(shí),如果蠟塊仍然與刀口非常接近,在手輪下一次完整旋轉(zhuǎn)時(shí),蠟塊將前出,前出量為退縮量+選定的切片厚度。這將導(dǎo)致切片厚度增加,并可能導(dǎo)致?lián)p壞蠟塊和刀片。

切片機(jī)也可以手動(dòng)、半自動(dòng)或全自動(dòng)。

自動(dòng)化設(shè)備可減少重復(fù)動(dòng)作,而這些動(dòng)作可能導(dǎo)致肌肉骨骼疾病。

10“修塊”、“表面加工”或“初步加工”時(shí)應(yīng)注意

切片機(jī)的該階段需要非常小心，因?yàn)闃颖颈砻婢哂性\斷學(xué)意義的組織很容易丟失或損壞。

在您開(kāi)始修塊之前,請(qǐng)務(wù)必確保所有的夾持機(jī)械均已得到安全加固。

正確修塊的目的在于將組織保守暴露至一定水平,在該水平可以獲得目標(biāo)性切片。

當(dāng)厚度為10至30μm時(shí),通常應(yīng)進(jìn)行修塊。

對(duì)脆性組織進(jìn)行快速粗修可能破壞標(biāo)本表面。在30μm厚度使用機(jī)械修塊設(shè)備時(shí)應(yīng)特別注意。

最后一步則通過(guò)輕柔切割少許薄切片對(duì)蠟塊進(jìn)行磨光。

在對(duì)蠟塊進(jìn)行修塊之前,持刀架底部夾架A、側(cè)向位移夾B和x-y定位夾C均應(yīng)該牢固鎖定。如果不執(zhí)行此操作,可能會(huì)損壞蠟塊和刀片。

當(dāng)進(jìn)行初步加工時(shí),機(jī)械修塊設(shè)備時(shí)應(yīng)謹(jǐn)慎使用,尤其是較低)設(shè)定被激活時(shí)可導(dǎo)致30μm的前出。

當(dāng)初步加工時(shí),粗進(jìn)刀輪需要謹(jǐn)慎使用,以避免從樣品表面意外切割較厚切片并造成損害。

11考慮切片厚度的影響因素

按照需要設(shè)定切片機(jī),但請(qǐng)注意,有許多因素均可影響實(shí)際的切片厚度。

4μm厚的粘性切片會(huì)比2μm厚的嚴(yán)重破壞切片提供更多的信息。

當(dāng)對(duì)冷凍蠟塊進(jìn)行切片時(shí),條帶中第一對(duì)切片的實(shí)際厚度可能比預(yù)期值厚。主要原因是由于熱膨脹(請(qǐng)參見(jiàn)下文第1、2和3節(jié))。

其他因素，如旋轉(zhuǎn)速度、間隙角設(shè)置和刀刃的情況,均會(huì)影響獲得的實(shí)際切片厚度。

12確保蠟塊冷凍

當(dāng)標(biāo)本和石蠟的硬度匹配良好時(shí),切片質(zhì)量通�？傻玫礁纳�。正是由于該原因,大多數(shù)石蠟塊在切片時(shí)必須冷凍。用于冷凍蠟塊的方法亦非常重要。

冷凍石蠟可為標(biāo)本中的較硬成分提供更好的支持,以獲得更薄的切片。

將蠟塊置于冷卻臺(tái)或濕冷表面,持續(xù)幾分鐘(比如融冰的表面)。

水將小幅度滲透進(jìn)入蠟塊,使組織腫脹,因此更適合進(jìn)行切片。對(duì)于過(guò)度脫水、過(guò)度干燥或易碎的組織,這將非常重要。

如果組織與周?chē)�石蠟存在接觸不良,將蠟塊置于冰箱中會(huì)導(dǎo)致此處的表面開(kāi)裂,可能更難以獲得粘性切片。

左邊的切片源自于一塊未進(jìn)行冷凍的溫度相對(duì)較高的蠟塊。右邊的切片源自于一塊相同、但在融冰表面進(jìn)行了冷卻的蠟塊。

以上便是本期教程內(nèi)容。該教程列出的切片機(jī)照片為RM2235手動(dòng)切片機(jī)，但所提供的建議和意見(jiàn)均可應(yīng)用于最先進(jìn)的輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)。本期教程已結(jié)束，敬請(qǐng)期待下期《石蠟切片的制備指南（下）》。

昊諾斯微信公眾號(hào)