第三代數(shù)字PCR技術(shù)應(yīng)用分享

數(shù)字PCR技術(shù)即Digital PCR技術(shù)真正實現(xiàn)了對目標(biāo)DNA或RNA分子進(jìn)行絕對定量，在精密度、準(zhǔn)確度和靈敏度方面有無與倫比的優(yōu)勢，同時解除了對Ct值和標(biāo)準(zhǔn)品的依賴，提高了抑制劑的耐受能力，因此被稱作第三代PCR技術(shù)。

Naica crystal 全自動微滴芯片數(shù)字PCR儀系統(tǒng)自動化生成25000~30000個微滴2D陣列，將DNA/RNA模板碎金分布在微滴中，達(dá)到每個微滴中只含有1個或不含有DNA/RNA模板，自動進(jìn)入PCR程序，實現(xiàn)核酸的單分子擴增，最后通過對微滴2D陣列進(jìn)行掃描后，讀取陽性微滴數(shù)，從而獲得目標(biāo)分子的濃度，還實現(xiàn)了結(jié)果的可視化質(zhì)控。人工操作只需5分鐘，2.5小時內(nèi)即可獲得結(jié)果，且實現(xiàn)了3個熒光通道檢測。

作為靈敏度最高的分子生物學(xué)工具，能夠準(zhǔn)確地區(qū)分低于2倍的濃度差異，并提高高背景內(nèi)源基因中目標(biāo)分子的分辨能力（如母體DNA為內(nèi)源基因和胎兒DNA為目標(biāo)己分子），在如下領(lǐng)域中都有廣泛的應(yīng)用：

腫瘤學(xué)研究

腫瘤學(xué)研究是數(shù)字PCR的重要應(yīng)用領(lǐng)域，該技術(shù)作為極為重要的工具，能夠識別DNA突變（例如EGFR）、腫瘤患者用藥監(jiān)控、基因擴增檢測、循環(huán)腫瘤細(xì)胞（CTC）特性研究、長鏈非編碼RNA檢測、液體活檢中循環(huán)的核酸（cfDNA）和腫瘤細(xì)胞（CTC）的絕對定量等研究中。

糖尿病

數(shù)字PCR技術(shù)目前在糖尿病中的研究熱點，通過定量檢測非甲基化DNA的水平，對I型糖尿病β細(xì)胞死亡進(jìn)行定量，從而監(jiān)控病情發(fā)展。

器官移植監(jiān)控

為了降低移植物排斥導(dǎo)致的風(fēng)險，數(shù)字PCR技術(shù)通過監(jiān)測受體中移植器官供體的循環(huán)DNA水平來檢測早期移植排斥。

食品和轉(zhuǎn)基因生物檢測

食品行業(yè)提供健康安全和優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，并希望能夠?qū)⑦@些信息傳遞給消費者。數(shù)字PCR技術(shù)能夠檢測和定量轉(zhuǎn)基因含量、來源于轉(zhuǎn)基因的原料或其他食品中常見的致病微生物，從而確保安全和品質(zhì)。

產(chǎn)前篩查

目前通過非侵入性產(chǎn)前檢測項目（NIPTs）的增加，降低了流產(chǎn)的風(fēng)險。通過檢測循環(huán)血液中的胎兒DNA，數(shù)字PCR技術(shù)作為無風(fēng)險的胎兒基因分型檢測方法，可以檢測非整倍體，微缺失，突變等。

肥胖

數(shù)字PCR技術(shù)能夠檢測到引起肥胖的重要因素之一AMY1（唾液淀粉酶）的基因拷貝數(shù)。

傳染性疾病

數(shù)字PCR技術(shù)可用于檢測病毒感染和細(xì)菌、HIV病毒潛伏庫^*監(jiān)測、殘留病毒載量（HIV，肝炎）等。

*病毒潛伏庫是指在免疫反應(yīng)和抗病毒治療壓力下，病毒潛藏的細(xì)胞場所或解剖場所。

環(huán)境監(jiān)測

為了增加土壤肥力，農(nóng)民通常會使用糞便或污水污泥等有機物。為了評估人類及生態(tài)系統(tǒng)是否暴露于經(jīng)土壤傳播的病原體和抗生素抗性基因，可以使用數(shù)字PCR技術(shù)進(jìn)行檢測和精準(zhǔn)定量，對于其他類似現(xiàn)象的研究也同樣具有應(yīng)用意義。