ELISA方法的基本類型、用途及操作程序

ELISA方法的基本類型、用途及操作程序

1、直接ELISA試劑盒

    本法首要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎（DVH）抗體的ELISA為例，直接ELISA的操作程序如下：

(1) 資料

① 包被液、洗刷液、保溫液、底物液、停止液；

② DVH包被抗原、酶標(biāo)抗抗體、陰性及陽性DVH參閱血清；待檢鴨血清；

③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。

(2) 方法過程

① 加抗原包被 → 4℃過夜，洗刷三次、拋干

② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗刷三次、拋干

③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 2小時，洗刷三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 30分鐘，加停止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值，并計算出P/N比值。

(3) 成果判定 已知陽性血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，并且已知陽性血清的OD值≥0.4；在上述條件建立的情況下，如果待檢血清與已知陰性血清的比值（P/N）≥2.1，并且待檢血清的OD值≥0.4，則判為陽性，不然判為陰性。

2、雙抗體夾心ELISA試劑盒

    本法首要用于檢測大分子抗原。現(xiàn)以檢測雞傳染性法氏囊病病毒（IBDV）的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。

① 加抗體包被 → 4℃過夜，洗刷三次、拋干

② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘，洗刷三次、拋干

③ 加酶標(biāo)抗體 → 37℃ 30分鐘，洗刷三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘，加停止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

3、雙夾心ELISA試劑盒

    此法與雙抗體夾心ELISA的首要差異在于：它是采用酶標(biāo)抗抗體查看多種大分子抗原，它不只不用符號每一種抗體，還可進(jìn)步試驗(yàn)的敏感性。

此法的根本程序?yàn)椋?/P>

① 加抗體（Ab-1）包被 → 4℃過夜，洗刷三次、拋干

② 加待檢抗原（Ag） → 37℃ 60分鐘，洗刷三次、拋干

③ 加用非同種動物出產(chǎn)的特異性抗體（Ab-2）→ 37℃ 60分鐘，洗刷三次、拋干

④ 加入酶標(biāo)抗Ab-2抗體（AB-3）→ 37℃ 60分鐘，洗刷三次、拋干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加停止液

⑥ 用ELISA檢測儀測定OD值。