熒光定量PCR在唐氏綜合征產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用

       沖學(xué)業(yè)、拼事業(yè)，現(xiàn)代人結(jié)婚年齡晚晚晚！

       隨著社會發(fā)展進(jìn)步，現(xiàn)代人受教育年限延長，再加上現(xiàn)代婚姻觀念和女性獨立意識的轉(zhuǎn)變，使得現(xiàn)代人結(jié)婚年齡一晚再晚。調(diào)查顯示，北京市初婚平均年齡達(dá)到27歲，較三年前提高了近一歲，而晚婚必然帶來晚育。

       受孕年齡滿34歲的婦女、生產(chǎn)時已滿35歲者，可稱之為高齡產(chǎn)婦。高齡產(chǎn)婦不但孕期風(fēng)險大，而且隨著年齡增大，卵子易過最佳“保質(zhì)期”，造成質(zhì)量下降、受精時染色體異常幾率變高等問題，導(dǎo)致胎兒致畸率增高。唐氏綜合征即21-三體綜合征，又稱先天愚型或Down綜合征（簡稱DS），即是由染色體異常（多了一條21號染色體）而導(dǎo)致的疾病，60%患兒在胎內(nèi)早期即流產(chǎn)，存活者有明顯的智能落后、特殊面容、生長發(fā)育障礙和多發(fā)畸形。。唐氏病兒隨母親年齡增大而發(fā)病率增高，母親年齡在35歲者，子女的發(fā)病率為1/300，40～45歲為1/100，45歲以上為1/50。

       在我國每年約有2萬多例唐氏綜合征患兒出生，本病目前尚無有效的根治方法，給患者家庭和社會造成了很大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，因此做好唐氏綜合征產(chǎn)前診斷，具有重大的經(jīng)濟(jì)和社會價值。

       國內(nèi)目前DS產(chǎn)前診斷的金標(biāo)準(zhǔn)為染色體核型分析法，，但是其操作繁瑣，檢驗周期長（各醫(yī)院不同，有的需一個月左右），對技術(shù)人員核型分析能力依賴性大。 熒光原位雜交( FISH) 檢測DS 患兒雖然快速，但價格較高，且實驗環(huán)節(jié)影響因素較多。全基因組拷貝數(shù)分析法可以對全基因組拷貝數(shù)變異進(jìn)行分析，但是該方法依賴公司芯片及大型分析設(shè)備，成本高，操作復(fù)雜，數(shù)據(jù)信息量大以致分析相對復(fù)雜，不能檢出嵌合型和異位型DS。

       除上述方法外，細(xì)胞遺傳學(xué)和分子遺傳學(xué)的學(xué)者們正在研究采用多重QS-PCR方法進(jìn)行唐氏綜合征產(chǎn)前診斷分析。對21 號染色體上多個短串聯(lián)重復(fù)序列( STR) 位點進(jìn)行多重QF-PCR擴增，PCR 產(chǎn)物進(jìn)行毛細(xì)管電泳，用GeneMapper 軟件對STR DNA 進(jìn)行多態(tài)性分型，每個STR 基因座檢測出現(xiàn)約1∶ 1∶ 1等比例峰或2∶ 1( 或1∶ 2) 峰為相應(yīng)染色體的三倍體，即為DS陽性。同時對患兒外周血進(jìn)行淋巴細(xì)胞培養(yǎng)和染色體核型分析，多重QS-PCR方法與染色體核型分析法所得結(jié)果基本一致。

        用多重QF-PCR 檢測DS 患兒成本大幅降低，且準(zhǔn)確快速（一天可出結(jié)果，減少患者等待的焦慮痛苦），可高通量檢測，判讀標(biāo)準(zhǔn)客觀，不僅可用于臍血、還可以用于羊水中胎兒脫落細(xì)胞和絨毛組織等標(biāo)本的快速檢測。與染色體核型分析聯(lián)用，起到有效的互補作用，具有較高的臨床應(yīng)用和推廣價值。

       值得注意的是，有研究報告顯示單個STR 檢測的陽性率為17% ～ 83%，4 個STR 組合的陽性檢出率達(dá)到100%，因此選取的STR 基因座數(shù)量和其遺傳效能、突變概率等直接影響到結(jié)果的準(zhǔn)確性。另外，嵌合體樣本其嵌合比例大�。ǘ鄶�(shù)學(xué)者認(rèn)為對于嵌合體的檢測，QF-PCR 一般可檢出嵌合比例大于10%的樣本），也將影響擴增的效果，可能產(chǎn)生漏檢。

       因此QF-PCR 法應(yīng)用于產(chǎn)前診斷如何避免假陽性和漏檢還需進(jìn)一步研究探討，建議制定規(guī)范化流程和標(biāo)準(zhǔn)，爭取早日進(jìn)入臨床應(yīng)用。