纖維素酶（cellulase，CL）/羧甲基纖維素酶活性測定 試劑盒說明書

纖維素酶（cellulase，CL）/羧甲基纖維素酶活性測定 試劑盒說明書

分光光度法 50 管/24 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

CL（EC 3.2.1.4）存在于細菌、真菌和動物體內(nèi)，能夠催化纖維素降解，是一類可廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、棉紡、環(huán)保及可再生資源利用等領(lǐng)域的酶制劑。

測定原理： 

采用蒽酮比色法測定CL催化羧甲基纖維素鈉降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃保存； 試劑二：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存； 臨用前加入 5mL 蒸餾水和 45mL 濃硫酸充分溶解待用。

樣品測定的準備：

1、細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量

（10⁴ 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

3、血清（漿）樣品：直接檢測。

測定步驟：

1、 分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

37℃振蕩反應(yīng) 1h 后，90℃水浴 15min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后

8000g 25℃離心 10min，取上清，得糖化液

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻，620nm 處蒸餾水調(diào)零，測定吸光值

A，計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。