酵母β-葡聚糖含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書

酵母β-葡聚糖含量化學(xué)比色法定量檢測試劑盒產(chǎn)品使用說明書

主要用途

YIJI 酵母β-葡聚糖含量化學(xué)比色法定量檢測試劑是一種旨在通過染料剛果紅與β-D-葡聚糖結(jié)合沉淀，產(chǎn)生吸光峰值的變化，來測定樣品中β-葡聚糖濃度的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種培養(yǎng)酵母菌種β-葡聚糖的含量檢測。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩(wěn)定。

技術(shù)背景

β-D-葡聚糖（β-D-glucan）是一種葡萄糖單體通過β-1,3或β-1,4主鏈和β-1,6側(cè)鏈上的糖苷鍵（glycosidic bond）鏈接而成的多聚體葡萄糖分子，普遍存在于植物中纖維素（cellulose）、谷粒外皮、以及藻類、真菌、酵母、蘑菇或細(xì)菌的胞壁等。其中β-1,3-D葡聚糖更為常見，具有生物活性和藥物特性，包括免疫刺激、抗炎、抗菌、抗傳染、抗癌、降低膽固醇、放射線的保護(hù)及傷口愈合等活性。β-D-葡聚糖的測定包括苯酚-硫酸法、剛果紅法、苯胺藍(lán)法和酶連續(xù)反應(yīng)法等，其中剛果紅法作為比色定量技術(shù)，操作非常方便�；�于β-D-葡聚糖，與剛果紅（Congo red；benzidinediazo-bis-1-naphthylamine-4-sulfonic acid）反應(yīng)產(chǎn)生沉淀復(fù)合物，呈現(xiàn)吸光峰值的降低（波長540nm），由此定量測定β- D-葡聚糖的含量。

產(chǎn)品內(nèi)容

YIJI 萃取液（Reagent A）   毫升

YIJI 稀釋液（Reagent B）      毫升

YIJI 反應(yīng)液（Reagent C） 毫升

YIJI 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D） 毫升

產(chǎn)品說明書 1份

保存方式

保存 YIJI 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）在－20℃冰箱里；其余的保存在4冰箱里；YIJI反應(yīng)液（Reagent C）避免光照；有效保證6月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

1.5毫升離心管：用于標(biāo)準(zhǔn)液配制或反應(yīng)的容器

（微型）臺(tái)式離心機(jī)：用于樣品操作

電爐：用于煮沸孵育

比色皿或酶標(biāo)板：用于染色后比色檢測的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

 樣品準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好5毫升待測的新鮮酵母細(xì)胞（OD600＝1.0，即1 X 10⁸細(xì)胞/毫升）
• 移入到15毫升錐形離心管
• 放進(jìn)4℃臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 渦旋震蕩15秒
• 煮沸水浴里孵育5分鐘
• 渦旋震蕩15秒
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI 萃取液（Reagent A）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)臺(tái)式離心機(jī)離心10分鐘，速度為1000g
• 小心抽去上清液
• 加入xx毫升YIJI  稀釋液（Reagent B），混勻
• 置于冰槽里備用

• 測定準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好待測樣品，置于冰槽里
• 設(shè)定好分光光度儀或酶標(biāo)儀（溫度為25℃）：波長540nm，并置零 
• 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管
• 按照下表配制標(biāo)準(zhǔn)液
• 將1至5號(hào)管置于室溫下備用；標(biāo)準(zhǔn)管濃度見下表

 

管號(hào)	YIJI 稀釋液（Reagent B）	YIJI 標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）	標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖含量
1	――	xx微升	xx微克
2	xx微升	xx微升1號(hào)管	xx微克
3	xx微升	xx微升2號(hào)管	xx微克
4	xx微升	xx微升3號(hào)管	xx微克
5	xx微升	0	0

• 標(biāo)準(zhǔn)曲線測定

• 加入500微升上述配制的標(biāo)準(zhǔn)液到1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 反應(yīng)液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取上清液到比色皿或酶標(biāo)板
• 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測：獲得相對吸光讀數(shù)
• 重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟1至6四次
• 構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線：縱座標(biāo)（Y軸）為相對吸光單位；橫座標(biāo)（X軸）為標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖含量（微克）

• 樣品測定

• 加入500微升上述制備的待測樣品到1.5毫升離心管
• 加入xx微升YIJI 反應(yīng)液（Reagent C）
• 渦旋震蕩15秒
• 放進(jìn)微型臺(tái)式離心機(jī)離心5分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如EPPENDORF 5415）
• 小心移取上清液到比色皿或酶標(biāo)板
• 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測：獲得相對吸光讀數(shù)
• 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得樣品對應(yīng)葡聚糖含量

• 計(jì)算樣品濃度

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為25次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)樣
• 本產(chǎn)品檢測范圍是100至300微克葡聚糖
• 操作時(shí)，須戴手套
• 比色測定后，比色皿須清洗徹底
• 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調(diào)整樣品濃度
• 本公司提供系列葡聚糖檢測相關(guān)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測敏感