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FastBlue蛋白染色液說明書

瀏覽次數(shù):6188 發(fā)布日期:2018-8-23  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)

FastBlue蛋白染色液說明書

儲(chǔ)存條件

常溫貯存,開封后一年有效。如4℃貯存,會(huì)有結(jié)晶形成,37℃溫浴融化后可繼續(xù)使用。

 產(chǎn)品簡介

FastBlue蛋白染色液是以考馬斯亮藍(lán)G-250為主要成分,采用新配方配置而成?捎糜赟DS-PAGE或非變性PAGE膠(native gel)的快速染色。

特點(diǎn):方便快捷-不用漂洗,不用加熱,不用脫色,不用固定,條帶2分鐘可見。

靈敏度高-檢測下限10ng蛋白

兼容性好-適用于變性和非變性膠以及質(zhì)譜分析

綠色環(huán)保-不含甲醇,冰醋酸

 用前必讀:

使用前如發(fā)現(xiàn)瓶中有少許沉淀,請(qǐng)混勻后使用。

2以下“使用方法”是針對(duì)0.75mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

● 使用方法:

1. 將電泳后的PAGE膠取下放入塑料容器中,用適量蒸餾水漂洗一下。

2. 棄蒸餾水,加入適量染色液(以剛剛覆蓋過膠面為適),搖床上常溫?fù)u動(dòng),根據(jù)下表確定染色時(shí)間。

待檢測蛋白量

染色時(shí)間

>1 μg

2分鐘

100ng-1μg

10分鐘

10ng-100ng

60分鐘

 

3. 觀察記錄結(jié)果。

● 附:質(zhì)譜處理程序

1. 切下待檢蛋白條帶置于1.5ml離心管中。

2. 加入1ml 30%乙醇或30%丙酮(也可用30%醋酸,但會(huì)導(dǎo)致蛋白N端酰基化)。

3. 處理30分鐘。 

4. 重復(fù)步驟2,3直到去除所有染料。一般處理2-3次既能完全去除染料。 

5. 質(zhì)譜分析。

 注意事項(xiàng):

1. 使用方法中的各種參數(shù)僅針對(duì)面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm的凝膠,如果使用更大面積或更厚的凝膠,請(qǐng)加入更多的染色液并延長染色的時(shí)間。

2. 常規(guī)染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都無必要。

3. 本染色液可以重復(fù)利用1-2次,敏感性會(huì)有輕微下降,請(qǐng)延長染色時(shí)間。

4. 本染色液有輕微腐蝕性,請(qǐng)帶手套操作。使用后,請(qǐng)蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

 

 問題解答:

Q1 FastBlue染膠的最佳溫度是多少?

A1 為達(dá)到最佳的染色效果,推薦常溫(20-25℃)染色。

Q2 FastBlue溶液需要低溫貯存嗎?

A2 Fastblue不需要低溫貯存,常溫貯存(20-25℃)即可。4-8℃貯存,F(xiàn)astBlue會(huì)有結(jié)晶生產(chǎn),37℃溫浴融化后可繼續(xù)使用。

Q3 FastBlue的染色原理是什么?

A3 FastBlue染色原理與經(jīng)典考馬斯亮藍(lán)G250染色原理相同(與蛋白質(zhì)中堿性氨基酸結(jié)合),優(yōu)點(diǎn)是更加快速和更高的靈敏度。

Q4 FastBlue染色后,凝膠可以用蒸餾水保存嗎?

A4 可以,蒸餾水保存最為簡單,也可以保存在稀釋的冰醋酸中。

Q5 FastBlue染色后的凝膠能做質(zhì)譜分析嗎?

A5 可以。請(qǐng)參閱“質(zhì)譜處理程序”

Q6 FastBlue染色的凝膠能做Weatern Blot嗎?

A6 不可以。蛋白的染色是不可逆的,染色的凝膠不能用作下游的轉(zhuǎn)膜操作。

Q7 Fastblue能重復(fù)使用嗎?

A7 FastBlue可以重復(fù)使用2-3次,但靈敏度有所下降,可以通過延長染色時(shí)間來彌補(bǔ)。

Q8 為什么凝膠過夜染色后條帶出現(xiàn)涂抹狀拖尾?

A8 FastBlue過夜染色不會(huì)對(duì)凝膠過度染色。出現(xiàn)抹涂狀拖尾原因是上樣量太大,因?yàn)镕astBlue染色靈敏度較高。另外,分子量較小的蛋白在過夜染色中會(huì)有擴(kuò)散現(xiàn)象,我們推薦染色最好在60分鐘內(nèi)完成。

Q9 FastBlue有固定凝膠的作用嗎?

A9 FastBlue是水系溶液,沒有固定凝膠的作用。然而,由于染色會(huì)在60分鐘內(nèi)完成,染色前無需對(duì)凝膠進(jìn)行固定。

 

來源:上海一基實(shí)業(yè)有限公司一部
聯(lián)系電話:021-60548335
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