侵襲美國(guó)及歐洲的西尼羅河病毒檢測(cè)方法

1. 西尼羅河病毒簡(jiǎn)介

西尼羅病毒 (West Nile Virus， WNV)于 1937年在非洲的烏干達(dá)首次被發(fā)現(xiàn) ， 從West  Nile地區(qū)的一位發(fā)熱的成年婦女血液中分離到， 因此得名 West Nile Virus。西尼羅病毒屬于黃病毒科黃病毒屬。黃病毒科成員還有登革熱病病毒、日本腦炎病毒以及黃熱病病毒等70 余種 ， 多屬于蟲媒病毒。西尼羅病毒廣泛分布于非洲、中東和西亞 ， 主要引起西尼羅河熱 (W est Nile Fever) ， 所致疾病大多為人畜共患病，引起嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題且多缺乏有效的治療 、預(yù)防和控制措施 ，給疾病控制提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。

2. 西尼羅河病毒病原學(xué)

西尼羅河病毒為RNA病毒，屬于黃病毒科，黃病毒鼠，病毒呈球形，有囊膜。其病毒離子大約為40nm，病毒的核酸為不分節(jié)段的單股正鏈RNA，約10000-11000個(gè)堿基。編碼3種結(jié)構(gòu)蛋白:病毒殼蛋白(C)、前膜蛋白(preM)、包膜蛋白(E)和七種非結(jié)構(gòu)蛋白 :NS1 、 NS2a 、NS2b 、 NS3 、 NS4a 、 NS4b 和NS5。E蛋白為西尼羅病毒最重要的抗原結(jié)構(gòu)蛋白，介導(dǎo)病毒與宿主結(jié)合， 能刺激機(jī)體產(chǎn)生相應(yīng)抗體，是決定病毒毒力的決定性蛋白，為病毒紅血球凝集素并介導(dǎo)病毒 -宿主的結(jié)合。

3. 流行病學(xué)及傳播

西尼羅病毒主要通過(guò)鳥—蚊—鳥 、人和動(dòng)物途徑傳播。該病毒可感染人、鳥類、多種哺乳動(dòng)物、兩棲類及爬行類動(dòng)物，人和鳥類最為易感，其所致疾病主要分布在沿鳥類遷移飛行路線所連接的歐洲 、非洲以及中東國(guó)家。 它的主要傳染源為處于病毒血癥期的帶毒動(dòng)物 ，和該病毒的自然儲(chǔ)存宿主-野鳥 ，傳播該病毒的蚊子主要包括庫(kù)蚊、伊蚊和曼蚊，特別是尖音庫(kù)蚊將病毒傳播給人 。蚊子因叮咬感染 WNV 的鳥類而帶毒，然后帶毒的蚊子通過(guò)叮咬將西尼羅病毒傳播給人和其他物 。西尼羅病毒能穿過(guò)血腦屏障，干擾正常的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能， 臨床上主要表現(xiàn)為腦炎或腦膜腦炎。西尼羅病毒病主要發(fā)生在晚夏或早秋，氣候常年溫暖地區(qū)四季均可發(fā)生WNV。

器官移植和輸血也可能是傳播的途徑，2002年，美國(guó)喬治亞洲公共衛(wèi)生部和美國(guó)CDC報(bào)告了2例不明原因的發(fā)熱和腦炎，經(jīng)調(diào)查該2名患者均移植了同一個(gè)感染西尼羅河病毒的人的器官。此外，哺乳傳播和傷口入侵傳播也是可能的傳播途徑，應(yīng)注意防護(hù)。

人 、動(dòng)物和鳥類等都是易感動(dòng)物 。如病毒可感染鳥(主要是烏鴉 )、蚊 (庫(kù)蚊 、伊蚊和曼蚊 )、人 、夜猴 、馬 、狗、貓 、豬 、駱駝 、雞 、鴨、鵝 、鴿子 、牛、蝙蝠、藍(lán)鳥、松鼠、和家兔等。

中國(guó)到目前為止還沒有發(fā)現(xiàn)西尼羅河病毒感染病例，但中國(guó)有很多地方夏天潮濕、炎熱，一些地方洪水泛濫，具備蚊蟲大量滋生的條件； 另外，隨著中國(guó)與世界其他國(guó)家之間的貿(mào)易、旅游、人員往來(lái)日益頻繁，具有傳播西尼羅河病毒潛在風(fēng)險(xiǎn)。因此在我國(guó)建立防治技術(shù)儲(chǔ)備是非常必要的。

4. 西尼羅河病毒感染的臨床特征

4.1 脊髓灰質(zhì)炎樣綜合征

表現(xiàn)為高熱 39 ℃以上 ， 前期表現(xiàn)為頭痛 、倦怠 、亦有寒戰(zhàn)、盜汗、肌痛以及意識(shí)混亂等；嚴(yán)重的肌無(wú)力也是常見癥狀， 雙側(cè)或單側(cè)上肢肌無(wú)力呈漸進(jìn)性發(fā)展，下肢無(wú)力甚至癱瘓；膀胱功能失調(diào)，急性呼吸窘迫。

4.2 西尼羅病毒性腦炎

大約有 1 /300 ～ 1 /150西尼羅病毒感染者可發(fā)展為無(wú)菌性腦膜炎 、腦炎或腦膜腦炎， 潛伏期大約為 2 ～ 14 d，臨床上表現(xiàn)為發(fā)熱 ，頭痛 ，抽搐，意識(shí)障礙和腦膜刺激癥等腦炎或腦膜腦炎癥狀 。

4.3 西尼羅熱

80 %的人感染 WNV 沒有臨床癥狀， 可自行康復(fù).西尼羅病毒感染者典型的癥狀表現(xiàn)為西尼羅熱，大約占感染者的 1 /3。潛伏期一般在1 ～6 d，臨床上表現(xiàn)為發(fā)熱 、頭痛 、倦怠、乏力、嗜睡 、疲勞感加重， 有或無(wú)前驅(qū)癥狀突然發(fā)病， 1 /3 以上的病人發(fā)熱可達(dá)到 38.3 ～ 40 ℃。部分病人還可出現(xiàn)嚴(yán)重的眼痛 、結(jié)膜水腫 、充血和肌肉酸痛等癥狀。

4.4 馬屬動(dòng)物感染

馬屬動(dòng)物感染 WNV 后很少出現(xiàn)臨床癥狀 ，但有 10 %的病例發(fā)展為嚴(yán)重的神經(jīng)性疾病，患馬精神抑郁 ， 食欲廢絕， 共濟(jì)失調(diào) ， 肌肉震顫， 后肢麻痹 ，視物不清，轉(zhuǎn)圈 ，無(wú)法吞咽 ，興奮 ，癱瘓甚至死亡。

5. 檢測(cè)方法

5.1 血清學(xué)檢測(cè)

血清學(xué)檢測(cè)是最常用的實(shí)驗(yàn)室臨床檢驗(yàn)方法。方法為酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)，該技術(shù)用于西尼羅河病毒IgG和IgM抗體的檢測(cè)， 在許多情況下代替了血凝抑制試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和中和試驗(yàn)。其中最有效的為捕獲法IgM 的ELISA 檢測(cè)方法， 感染 WNV 后 IgM的免疫應(yīng)答出現(xiàn)的比 IgG 早 ， 捕獲法ELISA不但可用來(lái)檢測(cè)血清中或大腦脊髓液中的WNV的IgM，而且 具有快速 、高敏性且能定量等優(yōu)點(diǎn)， 所以此技術(shù)可用于感染 WNV 的早期診斷，靈敏度高于PCR檢測(cè) 。該方法是現(xiàn)有檢測(cè)血清和腦脊液中病毒抗體最敏感的篩檢方法

5.2 病原學(xué)檢測(cè)

通常用于病毒分離的標(biāo)本有患者的腦脊液、處于病毒血癥的血清(持續(xù) 5d 左右)、腦組織 ，馬的腦和脊髓組織 ，鳥的腎、腦和心臟組織。一般使用己知的對(duì)西尼羅河病毒敏感的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系如 Vero細(xì)胞或蚊子細(xì)胞系來(lái)分離病毒。病毒分離法是檢測(cè)病毒的經(jīng)典技術(shù)， 是診斷病毒感染的“金標(biāo)準(zhǔn)” ，對(duì)于新發(fā)疾病病毒分離和病毒的自然宿主是非常有價(jià)值的工具 ，但此法要求條件高，分離率低， 操作復(fù)雜 ，所需時(shí)間長(zhǎng) ，不能夠快速、大量的進(jìn)行病毒診斷 。

此外，核酸檢測(cè)方法也用于西尼羅河病毒的檢測(cè)。如 RT - PCR， Taq Man RT-PCR 分析和核酸擴(kuò)增(NASBA)等都可用來(lái)鑒定病毒分離物是否為西尼羅河病毒。

6. 相關(guān)檢測(cè)產(chǎn)品信息

我公司提供西尼羅河病毒ELISA檢測(cè)試劑盒，可用于西尼羅河病毒感染的診斷，具體產(chǎn)品信息如下表所示：

產(chǎn)品編號(hào)	產(chǎn)品名稱	產(chǎn)品規(guī)格	方法學(xué)	檢測(cè)樣本	品牌
WNMS-1	捕獲法西尼羅河病毒IgM檢測(cè)試劑盒	96T	捕獲法ELISA	血清	美國(guó)InBios
WNGS-1	西尼羅河病毒IgG檢測(cè)試劑盒	96T	ELISA	血清	美國(guó)InBios

7. 參考文獻(xiàn)

[1] 呂喆,于亞洲,胡桂學(xué),趙哲.西尼羅河病毒病的研究進(jìn)展[J].經(jīng)濟(jì)學(xué)報(bào),2012,16(01):55-59.

[2] 付鈺廣,任巧云,羅建勛,殷宏.西尼羅病毒診斷的研究進(jìn)展[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2011,27(08):742-745.

[3] 常華,花群義,項(xiàng)勛,曾昭文,段綱.西尼羅病毒研究進(jìn)展[J].云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2006(01):76-80.

[4] 李永平,馮官光,易玉珍.國(guó)內(nèi)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的研究現(xiàn)狀及展望[J].中華眼科雜志,2004(04):4-6.

[5] 王政,王林川.西尼羅河病毒的流行病學(xué)研究概況[J].廣東畜牧獸醫(yī)科

技,2004(02):17-18+21.

[6]Siddharthan V, Wang H, Motter N E , et al.Persistent West Nile Virus associated with a neurological sequela in hamsters identified by motor unit number estimation[ J] .Virol, 2009 ,83:4251-4261.

想了解更多產(chǎn)品資訊，掃碼關(guān)注微信公眾號(hào)