遠(yuǎn)離噪音點(diǎn)：western blot封閉那些事

Western blot封閉步驟為什么重要？
 
樣品從凝膠轉(zhuǎn)印到膜上后，在抗體孵育之前都要進(jìn)行封閉的步驟。 了解封閉的工作原理可提高western blot的質(zhì)量，提高數(shù)據(jù)的特異性，靈敏度和信噪比。
 
蛋白封閉液是如何工作的？
通用的PVDF膜和NC膜具有很強(qiáng)的蛋白結(jié)合能力，如果跳過封閉步驟，一抗或二抗可能非特異性地與膜結(jié)合，導(dǎo)致高背景或“噪音點(diǎn)”的印跡（ 圖1）。 封閉緩沖液覆蓋或“封閉”這些非特異性蛋白結(jié)合位點(diǎn)，確保大部分一抗僅與靶蛋白結(jié)合（圖2）

如果選擇有效的封閉緩沖液，可以減少非特異性結(jié)合而不干擾抗體 - 抗原結(jié)合。


如何進(jìn)行封閉液的選擇？
 選擇正確的封閉緩沖液取決于幾個(gè)因素，包括一抗的靶標(biāo)和正在使用的檢測(cè)系統(tǒng)。 一些最常用的封閉緩沖液含有蛋白質(zhì)封閉試劑。 蛋白封閉試劑可以是蛋白質(zhì)混合物，例如脫脂奶粉或血清，或單一蛋白質(zhì)，例如BSA。 脫脂奶粉是一種流行的封閉試劑，因?yàn)閮r(jià)格低廉且易于找到。 然而，牛奶含有磷蛋白，可能干擾抗磷酸化蛋白抗體western blot檢測(cè)。 牛奶還可以干擾基于生物素 - 鏈霉抗生物素蛋白的檢測(cè)系統(tǒng)。 在這些情況下，含有BSA的封閉緩沖液可能是優(yōu)選者。 或者，為了避免抗體和蛋白封閉試劑之間潛在的交叉反應(yīng)，可以使用無蛋白封閉試劑如PVP-40。
Azure Fluorescent Blot Blocking Buffer經(jīng)過優(yōu)化，配合Azure多功能成像系統(tǒng)和sapphire雙模式多光譜激光成像系統(tǒng)使用，可降低背景噪音和產(chǎn)生穩(wěn)定熒光信號(hào)。