細(xì)胞有絲分裂的實(shí)驗(yàn)操作步驟

 細(xì)胞有絲割裂指數(shù)(mitotic index，MI)是指歸于割裂期的細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分率．用于表明細(xì)胞增殖旺盛的程度，也可用于檢查藥物對(duì)細(xì)胞增殖能力的影響。用蓋玻片培育法培育細(xì)胞，做固定和染色后，鏡下調(diào)查和計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中處于割裂期的細(xì)胞數(shù)并核算MI。
 
(一)材料
 
1．待檢資料(藥物)。
 
2．細(xì)胞培育成層的貼壁細(xì)胞。
 
3．試劑 甲醇、3％吉姆薩染液。
 
4．器材CO2培育箱、倒置顯微鏡、蓋玻片(2．2 cm×2．2 cm，需預(yù)先清潔和滅菌處理)、塑料培育皿(3．5 cm)、載玻片、封片用蓋玻片、中性樹(shù)膠。
 
(二)試驗(yàn)辦法
 
1．將細(xì)胞消化成單個(gè)細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分瓶培育，分紅不加藥的對(duì)照組和加人不一樣劑量藥物的試驗(yàn)組。
 
2．細(xì)胞傳代培育的辦法培育細(xì)胞，并制成濃度為105／ml的細(xì)胞懸液。
 
3．將清潔和滅菌處理的蓋玻片放置在塑料培育皿中，將細(xì)胞懸液搖勻后接種于培育皿中，各皿中接種量一樣。
 
4．別離于培育24 h、48ht和72h后從培育皿中取出蓋玻片，在Hanks液中漂洗2～3次。
 
5．先用甲醇固定30 min，再用吉姆薩染液染色。曬干后用中性樹(shù)膠封片。
 
6．油鏡下或高倍鏡下計(jì)數(shù)1000個(gè)細(xì)胞中處于割裂期的細(xì)胞數(shù)。
 
7．核算MI按下列公式核算MI。
 
(三)成果與分析
 
    將對(duì)照組和藥物組的試驗(yàn)成果繪制成直方圖并加以比較，也可繪制成MI曲線進(jìn)行比較：
 
(四)注意事項(xiàng)
 
1．為了削減誤差，試驗(yàn)者有必要了解各期割裂象細(xì)胞的形狀特征，該試驗(yàn)從頭到尾最好由一人完結(jié)，當(dāng)兩人以上調(diào)查時(shí)，應(yīng)把握一樣的標(biāo)準(zhǔn)。
 
2．MI曲線與細(xì)胞生長(zhǎng)曲線趨勢(shì)根本相似，但不徹底一樣。如果在細(xì)胞增長(zhǎng)達(dá)飽和密壁并進(jìn)入中止期后．細(xì)胞數(shù)量許多，而割裂象細(xì)胞可徹底消失。
 
3．細(xì)胞在蓋玻片上的密度常不均勻，細(xì)胞密集區(qū)與稀疏區(qū)的割裂象細(xì)胞數(shù)目也許不一樣。計(jì)數(shù)時(shí)要挑選密度近似區(qū)，以削減試驗(yàn)誤差。