ACE C18-PFP色譜柱介紹Ⅱ- 改善分離度
1.有保證的可重現(xiàn)性
2.極佳的鍵合相穩(wěn)定性
3.疏水和五氟苯基“混合模式”的相互作用
改善色譜分離度
色譜分離的目標(biāo)是在最短的時間內(nèi)獲得目標(biāo)組分的足夠分離度（Rs）。
1.5的分離度可以實(shí)現(xiàn)基線分離，然而對于可以在實(shí)驗(yàn)室之間易于轉(zhuǎn)換的耐用、可重復(fù)方法而言，理想的分離度是1.8-2.0。
分離度方程告訴我們什么變量可以影響分離度：
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Rs = 目標(biāo)峰之間的分離度 N = 柱效- 由理論塔板數(shù)測定 α= 選擇性- 兩峰的保留值比率（k值） k =保留因子- 洗脫峰所需的柱體積數(shù) |
增加分離度Rs可以通過增加N、α或k來實(shí)現(xiàn)。
然而，如圖1所示，可以看出，增加N或k以改善Rs的回報率快速下降。
例如，Rs僅隨著N平方根的增加而增加。
可以通過增加柱長或降低柱填充材料的粒徑或兩者的某種組合來增加N。
無論哪種方式，系統(tǒng)背壓隨著N的增加而增加，因此通過增加N實(shí)現(xiàn)令人滿意的分離，其“成本”可能是極高的壓力。
同樣，增加保留值（k值）將會增加Rs，但回報率也快速下降。
將k增加至超過10通常是Rs與分析時間之間的不利權(quán)衡，因?yàn)橹挥蠷s的邊際收益隨著保留時間的增加而實(shí)現(xiàn)。
該效應(yīng)的圖形表示參見下述圖1。
圖1 N、α和k對分離度(Rs)的影響
對于典型的分離，其中：N = 10,000, k = 4, α= 1.1
增加N、α或k可以提高分離度(Rs)。
然而，從這些圖中可以看出，N或k的提高都會迅速降低回報率。
另一方面，提高選擇性（α）則沒有這個問題，因此其成為開發(fā)分離方法時的最佳優(yōu)化變量。
增加α可以增加Rs，但不同于N和k,不會受回報率下降的約束。
α的變化對壓力沒有影響，對分離時間的影響也是微乎其微的（參見圖2）。
因此，在開發(fā)分離方法時，α是最重要的變數(shù)。
優(yōu)化α可以使您在所有目標(biāo)峰之間達(dá)到滿意的分離度，同時保持系統(tǒng)背壓和分離時間在可接受范圍內(nèi)。
改善色譜分離度- 選擇性或柱效？
選擇性(α)由流動相、溫度和固定相化學(xué)物質(zhì)控制。大多數(shù)方法開發(fā)策略將探索所有這些色譜變量。
如果使用“標(biāo)準(zhǔn)”3μm C18相沒有達(dá)到足夠的分離度，推薦優(yōu)化分離的色譜選擇性而不是分離柱效，如下述實(shí)例所示。
通過簡單地將固定相化學(xué)物質(zhì)（即色譜柱）改變?yōu)榫哂刑娲V選擇性的固定相化學(xué)物質(zhì)，易于在標(biāo)準(zhǔn)HPLC系統(tǒng)上獲得所需分離度，而無需昂貴的UHPLC儀器。
另外，也可以避免復(fù)雜的流動相組分、升高的溫度和侵蝕性pH條件。
圖2利用選擇性實(shí)現(xiàn)快速、高分離度的分離
樣品：1）對乙酰氨基酚2）氫氯噻嗪3）甲基苯基亞砜4）甲基苯基砜5）阿司匹林6）非那西丁7）1,3-二硝基苯
8）1,2,4-三甲氧基苯9）苯甲酸乙酯10）尼美舒利11）布洛芬12）吲哚美辛13）甲芬那酸
色譜柱尺寸：50 x 2.1 mm 流速：0.60 ml/min 溫度：40°C 檢測：UV, 254 nm 流動相：A = 5 mM甲酸（溶于水中）以及B = 5 mM（溶于甲醇中），梯度= 在5分鐘內(nèi)3-100% B
比較數(shù)據(jù)不代表所有應(yīng)用。
在保持C18鍵合相的同時，將粒徑從3μm減小至2μm以下，并不能顯著改善分離效果，另外也會導(dǎo)致壓力明顯增加。
ACE C18-PFP色譜柱為3個關(guān)鍵對提供了更佳的選擇性(α)，因此與2μm以下的C18色譜柱相比，其可以提供極佳的分離效果，即使2μm以下的色譜柱可以提供更高的柱效。
與使用具有高塔板數(shù)和高壓的色譜柱嘗試進(jìn)行峰分離所獲得的結(jié)果相比，利用選擇性的能力可以獲得更佳的分離效果。
